Etude structurale des arn polymerases de saccharomyces cerevisiae : localisation des sites de liaison du zinc et du nucleotide initiateur. identification de deux nouvelles sous-unites communes

par ISABELLE TREICH

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de ANDRE SENTENAC.

Soutenue en 1992

à Paris 7 .

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  • Résumé

    Ce travail concerne l'etude des relations structure-fonction au sein des arn polymerases de levure. Nous avons montre que les deux plus grandes sous-unites des arn polymerases de s. Cerevisiae, ainsi que les sous-unites b44,5, a12,2, b12,6, abc10alpha et abc10beta lient le zinc #6#5zn(ii) in vitro. L'extremite c-terminale de la sous-unite b150 contient un motif potentiel de liaison du zinc de la forme cx#2cx#8##2#5cx#2c. Ce domaine, surproduit dans e. Coli, lie le zinc in vitro et la mutagenese des quatre cysteines diminue la fixation du metal. De meme, la region n-terminale des sous-unites b220 et c160 lie le zinc in vitro. Elle contient un motif complexe de liaison des metaux qui est necessaire a la structure ou a la fonction de l'enzyme. Plusieurs criteres biochimiques et des elements de microsequence peptidique nous ont permis d'identifier deux nouvelles sous-unites communes aux trois arn polymerases, abc10alpha et abc10beta. Le gene codant pour la sous-unite abc10alpha a ete clone et sequence. Il code pour une proteine basique de 70 acides amines qui est essentielle a la viabilite cellulaire. Son gene est unique et localise sur le chromosome viii. La sequence proteique revele la presence d'un doigt de zinc, de la forme cx#2cx#1#3cx#2c, qui explique la liaison du zinc par cette sous-unite. Des experiences de mutagenese ont permis d'identifier les lysines impliquees dans le marquage d'affinite de la sous-unite b150 par des analogues de nucleotides. Nous avons montre que la lysine 1102 (domaine conserve i), et la lysine 979 ou la lysine 987 (domaine conserve h) interagissent avec les derives de l'atp au niveau du site actif


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  • Annexes : 163 REF

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  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
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  • Cote : TS1992
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