Etude et ingenierie de motifs peptidiques responsables de la dimerisation de proteines regulatrices

par ARNAUD BLONDEL

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Hugues Bédouelle.

Soutenue en 1992

à Paris 7 .

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  • Résumé

    La proteine ma1e d'e. Coli a servi de vecteur pour etudier les motifs peptidiques responsables de la dimerisation de proteines regulatrices. Ainsi, le leucine zipper de gcn4 de levure ou la proteine du gene 5 du phage m13 (g5p) ont ete greffes a l'extremite c-terminale de ma1e et etudies. Les hybrides resultants ont ete produits et exportes efficacement dans e. Coli. Les hybrides se purifient independamment de leurs proprietes en utilisant l'affinite de ma1e pour l'amylose reticulee. Des mesures biophysiques montent que les hybrides forment des dimeres. La g5p qui fixe l'adn simple brin (adnsb), conserve cette propriete lorsqu'elle est greffee a ma1e. Des mutations concues a partir de la structure cristalline de la g5p ont ete introduites pour etudier les relations entre dimerisation et fixation a l'adnsb. Pour des raisons de purification, les mutants de la g5p ont ete etudies sous forme d'hybrides avec ma1e. Une deletion dans le domaine de fixation a l'adnsb n'affecte pas la dimerisation. En revanche, les alterations de la dimerisation induisent une diminution correlee de l'affinite pour l'adnsb. La correlation entre toxicite de la forme libre et fixation a l'adnsb de la forme hybride portant les memes mutations valide le systeme pour etudier la fonctionnalite de la g5p. La reactivite au dtnb a permis de montrer que la structure de la g5p est sensiblement perturbee par ma1e. L'utilisation de ma1e et les differences entre structures cristallographiques et rmn de la g5p sont discutees


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Informations

  • Annexes : 175 REF

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  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
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  • Cote : TS1992
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