Maturation, comportement osmotique et cryopreservation de l'ovocyte caprin au stade vesicule germinative

par FRANCOIS LE GAL

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Jean-Paul Renard.

Soutenue en 1992

à Paris 6 .

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  • Résumé

    Par addition de cycloheximide a differents moments de la culture in vitro, nous avons montre chez la chevre, qu'une synthese de proteines est necessaire a trois moments cles de la maturation meiotique: i) pour la rupture de la vesicule germinative (gvbd); ii) pour l'etablissement de la metaphase i (mi). Iii) pour l'etablissement de la metaphase ii (mii). Le radiomarquage des proteines (35 s-methionine) couple a l'observation du stade meiotique de l'ovocyte (hoechst) nous a permis de correler les variations des profils de synthese proteique avec les etapes majeures de la maturation nucleaire: ainsi le deplacement de mobilite electrophoretique d'un polypeptide de 25 a 27 kd est caracteristique de gvbd et celui d'un polypeptide de 34 et 33 kd caracteristique de la mi. La transition mi-mii est, elle, caracterisee par une augmentation de la synthese d'un polypeptide de 67 kd et une diminution de la synthese d'actine (43 kd). Contrairement a toutes les especes etudiees jusqu'a maintenant, l'addition de 6 dmap a l'initiation de la culture n'inhibe pas gvbd mais conduit a la formation d'une masse chromatinienne condensee (mcc). De meme, l'addition de cet inhibiteur a tout moment du cycle anterieur a la mii induit egalement a la formation d'une mcc. L'etude des profils de phosphorylation proteique au cours de la maturation n'ayant revele aucune difference qualitative ou quantitative entre les ovocytes traites au 6 dmap et les ovocytes temoins, le mode d'action de cette drogue chez l'espece caprine demeure inconnu. Dans une seconde partie, nous avons modelise le comportement osmotique de l'ovocyte lors d'une exposition aux cryoprotecteurs et compare la permeabilite de la membrane plasmique des ovocytes immatures (stade gv) et matures (ovules, stade mii). L'ovocyte immature est plus permeable a l'eau (122 vs 72. 3 10-3 cm/mn) mais moins permeable au propanediol (0. 99 vs 1. 38 10-3 cm/mn) que l'ovocyte mature. Cette difference de comportement osmotique entre les ovocytes avant et apres maturation etant abolie par pretraitement des ovocytes a la cytochalasine d avant exposition au propanediol (coefficients de permeabilite pour les ovocytes des deux stades respectivement de 0. 5 10-3 cm/mn pour le propanediol et 50 10-3 cm/mn pour l'eau), ceci suggere fortement l'intervention du reseau cortical d'actine dans la regulation de la permeabilite membranaire (sans doute via des modifications rheologiques du cytoplasme), une hypothese etayee par notre etude en immunocytochimie qui montre que le reseau d'actine cortical est plus stable au stade mii qu'au stade gv. Dans la derniere partie, nous avons etudie l'aptitude a la maturation et a la fecondation in vitro des ovocytes congeles au stade gv. Apres un cycle de congelation-decongelation, le pourcentage d'ovocytes accomplissant leur maturation in vitro est de 24% tandis que ceux des ovocytes temoins ou exposes au cryoprotecteur (sans congelation) sont respectivement de 82 et 71%. Ce resultat demontre donc que l'effet deletere sur l'aptitude des ovocytes a maturer apres congelation est essentiellement imputable a la congelation stricto sensu, les sites majeurs d'alteration etant la rupture de la membrane plasmique ou de l'enveloppe nucleaire et un changement de conformation de la chromatine. L'etude des profils de synthese proteique des ovocytes congeles au cours de la maturation in vitro a cependant montre qu'une partie de ces ovocytes conservent une activite de synthese tout a fait semblable a celle des ovocytes temoins, et que donc leur metabolisme proteique n'a pas ete altere. En revanche, la diminution d'aptitude a la fecondation in vitro des ovocytes congeles est consecutive a la phase d'addition ou de retrait du cryoprotecteur puisque le rendement d'obtention d'ufs au stade 2 pronuclei est identique pour les ovocytes congeles ou simplement exposes au cryoprotecteur

  • Titre traduit

    Maturation, osmotic behaviour and cryopreservation of goat oocyte at the germinal vesicle stage


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  • Détails : 183 P.
  • Annexes : 240 REF.

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