Approche structurale de la glucosamine 6-phosphate synthase d'escherichia coli : cartographie de ses epitopes par utilisation d'anticorps monoclonaux et de peptides synthetiques

par OLIVIER COCHET

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Bernard Badet.

Soutenue en 1992

à Paris 6 .

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  • Résumé

    La glucosamine 6-p synthase est une amidotransferase qui catalyse la 1ere reaction de la voie des hexosamines liberant de la glucosamine 6-p a partir de fructose 6-p et de glutamate. L'enzyme d'escherichia coli est un homodimere dont chaque sous-unite est composee de deux domaines ct1 et ct2, portant les sites catalytiques. L'outil immunologique a ete utilise afin de localiser et caracteriser les structures antigeniques de la proteine. Quinze anticorps monoclonaux (acm) anti-enzyme ont ete produits et leur specificite vis-a-vis des deux domaines ct1 et ct2 a ete determinee par methode immunoenzymatique. Au sein des deux domaines, des regions antigeniques ont ete definies, traduisant l'existence d'epitopes topologiquement distincts. La stabilite structurale des epitopes sur l'enzyme (g1ms) a ete etudiee avec les acm et, en fonction de l'environnement physique de l'enzyme (solide ou liquide), des modifications importantes des epitopes ont ete observees. Les epitopes lineaires de la g1ms ont ete recherches en synthetisant plus de 600 octapeptides chevauchants, correspondant a la sequence entiere de la proteine. Les peptides ont ensuite tous ete testes par elisa avec chaque acm. L'un des acm s'est avere etre un puissant inhibiteur de l'activite enzymatique de la g1ms (ki=0,04 nm) et sa specificite pour un epitope en relation directe avec le site glutamine a pu etre etablie. Les homologies de sequence entre diverses amidotransferases ont laisse supposer l'existence de determinants antigeniques communs et ont permis d'envisager l'utilisation de ces acm dans la detection et/ou la purification de la g1ms d'especes differentes


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  • Détails : 157 P.
  • Annexes : 117 REF.

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