Realisation de nouveaux supports a base de copolymeres reactifs adsorbes sur silice poreuse. Etude de leurs proprietes en chromatographie d'echange d'ions de proteines. Etude quantitative des parametres d'interaction en chromatographie d'affinite

par MARIE-PIERRE VIVARAT-PERRIN

Thèse de doctorat en Sciences appliquées

Sous la direction de Bernard Sébille.

Soutenue en 1992

à Paris 6 .

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  • Résumé

    De nouveaux supports ont ete obtenus par adsorption de copolymeres reactifs sur silice poreuse. Ils ont ete appliques a la chromatographie liquide haute pression. Les copolymeres synthetises sont composes de n-vinylpyrrolidone et de chloroformiate de vinyle ou de vinylcarbonate de n-hydroxysuccinimide. Une etude infrarouge montre que les motifs pyrrolidone ont une forte energie d'interaction avec les silanols et sont principalement responsables de l'adsorption des copolymeres sur la silice. Les motifs chloroformiate ou n-hydroxysuccinimide permettent le greffage des ligands en milieu organique ou aqueux. Des supports chromatographiques d'echange de cations ont ete realises par fixation de l'acide aminomethane sulfonique. Les proprietes chimiques des supports sont caracterisees par l'etude de la retention de proteines en fonction du ph, de la densite de charges, de la quantite de polymere adsorbee. A saturation de la silice en copolymere, les interactions chimiques sont liees uniquement a la presence des sites sulfonate. Les groupements silanol sont inaccessibles aux proteines. Des supports d'affinite sont obtenus par greffage de p-aminobenzamidine. Ils permettent la purification de la trypsine. Des etudes analytiques ont ete realisees dans des conditions de retention reversible de la trypsine par addition dans l'eluant d'un competiteur soluble. Elles montrent l'importance des caracteristiques structurales de la silice pour une analyse quantitative des parametres d'interaction. Divers modeles theoriques en elution zonale lineaire ou non lineaire ont ete appliques

  • Titre traduit

    Preparation of new supports based on reactive copolymers on porous silica. Study of their properties in ion exchange chromatography of proteins. Quantitative study of interaction parameters in affinity chromatography


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  • Annexes : 126 REF

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1992
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