Structure et fonction de l'endoglucanase celd de clostridium thermocellum

par SYLVIE CHAUVAUX

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Pierre Béguin.

Soutenue en 1992

à Paris 6 .

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  • Résumé

    Clostridium thermocellum, bacterie de type gram positif, anaerobie et thermophile, est un microorganisme cellulolytique tres performant. C. Thermocellum secrete au moins 18 polypeptides differents qui sont organises en cellulosome, complexe multienzymatique et cellulolytique d'environ 2 mda. L'endoglucanase celd est un des constituants du cellulosome qui appartient a la famille e de cellulases. Le calcium diminue le k#m et augmente la thermostabilite de celd. Celd fixe le calcium avec une constante d'association de 210#6 m##1 et possede deux sites de fixation par molecule. La deletion genetique de la sequence dupliquee et conservee dans la plupart des endoglucanases et une xylanase de c. Thermocellum n'affecte ni l'activite ni la fixation du calcium. Chacun des 12 codons his du gene celd a ete mute. La proteine mutee au niveau du residu his-516 est resistante a l'inactivation par le diethylpyrocarbonate, ce qui indique que his-516 est localise dans le centre actif. Cependant, la modification chimique et la mutagenese dirigee n'entrainant qu'une inactivation de 75%, his-516 ne participe vraisemblablement pas directement a la catalyse. Douze codons de residus carboxyliques ont ete mutes. Les cinq proteines mutees et inactives ont ete purifiees. En dehors du k#c#a#t, les parametres physico-chimiques et enzymatiques de la proteine portant la mutation du residu glu-555 sont identiques a ceux de la proteine sauvage. Glu-555 est donc vraisemblablement un residu du site actif suggerant une catalyse generale de type acide-base. La mutation du residu asp-198 ou asp-201 inactivant totalement la proteine, l'un de ces deux residus pourrait egalement participer a la catalyse. La structure tri-dimensionnelle confirme que celd utilise un mecanisme catalytique de type acide-base dans lequel glu-555 protone la liaison glucosidique et asp-201 produit l'ion oh# qui participe a la substitution nucleophile du carbone anomere avec inversion de configuration. His-516 serait implique dans la fixation du substrat


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  • Annexes : 202 REF

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1992
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