Etude quantitative du transport facilite de k#+ au niveau de la membrane plasmique vegetale a l'aide de vesicules isolees et de sondes fluorescentes

par KEES CM VENEMA

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de CLAUDE GRIGNON.

Soutenue en 1992

à l'ENSA MONTPELLIER .

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  • Résumé

    Des methodes adaptees aux vesicules membranaires isolees ont ete developpees afin d'utiliser de facon quantitative le signal de sondes moleculaires fluorescentes repondant aux ions k#+ (pbfi), h#+ (pyranine), et au potentiel de membrane (oxonol vi). A l'aide d'un compteur de photon multicanaux, il a ete possible de mesurer simultanement les flux de k#+ ou de h#+, et le potentiel de membrane. La coherence des mesures a ete verifiee a l'aide des equations classiques de diffusion, appliquees aux resultats obtenus avec des liposomes. Ces liposomes ont ensuite ete utilises pour la reconstitution des proteines de la membrane plasmique de racines de mais. L'objectif etait de produire une population homogene de vesicules tres etanches aux petits ions a partir de la collection complete des proteines plasmiques, celles-ci etant inserees de facon unidirectionnelle. La disponibilite d'une membrane artificielle asymetrique modele de la membrane plasmique repondait a deux necessites: (i) dresser un inventaire des differents systemes de transport de k#+; (ii) determiner leur asymetrie fonctionnelle. Une strategie biophysique a ete definie a l'aide des liposomes et de differents ionophores afin de faciliter la mise en evidence et la caracterisation du transport facilite de k#+. Les premieres applications ont permis de mettre en evidence un transport facilite de k#+ tres asymetrique (k#m de 10 mm et de 0,3 mm respectivement pour les faces externes et internes des vesicules, correspondant vraisemblablement aux sites cytoplasmiques et externes des transporteurs). Ce transport presente un optimum d'activite a ph 6. 0 et est inhibe par le pcmbs


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  • Détails : 132 P.
  • Annexes : 181 REF.

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