Développement et transfert technologique de procédés chromatographiques destinés à la préparation de composés biologiques à usage thérapeutique : exemples de purification du facteur VIII et de l'immunoépuration du LDL-cholestérol

par Marc de Seyssel

Thèse de doctorat en Génie biologique

Sous la direction de Claude Rivat.

Soutenue en 1992

à Nancy 1 .


  • Résumé

    L'utilisation de techniques chromatographiques dans la préparation des composés biologiques à usage thérapeutique a permis d'améliorer aussi bien la purification de protéines plasmatiques que le traitement du plasma par épuration en circulation extracorporelle. Dans le premier exemple d'application destiné à la préparation du facteur VIII antihémophilique, l'insertion d'une étape chromatographique par échangeur d'anions fort a été réalisée dans le procédé classique de purification. Cette étape permet d'obtenir un concentré de facteur VIII de très haute pureté à partir de cryoprécipité. L'optimisation de cette étape au laboratoire a permis de réaliser sa transposition à l'échelle pilote. Le facteur VIII ainsi obtenu possède une activité spécifique de 150 Ul/mg de protéines pour un rendement global de 25%. De plus ce composé a été soumis à une inactivation des virus par solvant/détergent. Dans le second exemple d'application destiné au traitement de l'hypercholestérolémie familiale, la fabrication de supports chromatographiques à base d'anticorps polyclonaux de chèvre a été réalisée pour permettre le traitement du plasma par immunoépuration du LDL-cholestérol. Des colonnes de 300 ml ont été fabriquées par fixation de 5 mg d'anti Apo B/ml de Sepharose CL-4B activé au BrCN dans des conditions stictes de stérilité et d'apyrogénicité. Une étude comparative réalisée in vitro avec 5 adsorbants utilisés en LDL-aphérèse (Héparine Sepharose, Sulfate de Dextran-Cellulose et 3 immunoadsorbants à base d'anticorps polyclonaux ou monoclonaux) révèle une capacité d'adsorption similaire (4 mg d'Apo B/ml de gel) mais une meilleure sélectivité des immunoadsorbants.


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Informations

  • Détails : 1 vol. (161 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 139-161

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  • Bibliothèque : Université de Lorraine (Vandoeuvre-lès-Nancy, Meurthe-et-Moselle). Direction de la Documentation - BU Santé.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : T/NCY/1992/SEYSSEL
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : BIUM Nancy 1992
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