Contribution à l'étude de la glutamine synthétase et de la glutamate déshydrogénase à NADP chez le champignon ectomycorhizien laccaria laccata : purification, propriétés physico-chimiques et localisation dans les ectomycorhizes de Douglas

par Annick Brun

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Bernard Botton.

Soutenue en 1992

à Nancy 1 , en partenariat avec Université Henri Poincaré Nancy 1. Faculté des sciences et techniques (autre partenaire) .


  • Résumé

    La glutamine synthétase (gs) et la glutamate déshydrogénase à nadp (gdh a nadp) sont deux enzymes clés de l'assimilation de l'ammonium. Ces deux enzymes ont été purifiées à homogénéité électrophorétique chez le champignon ectomycorhizien laccaria laccata. , selon un protocole simple utilisant trois étapes chromatographiques. A l'issue de ce protocole, la gs a été purifiée 31 fois avec un rendement de 23%, alors que la gdh a nadp a été purifiée 688 fois avec un rendement de 62%. Les constantes d'affinité des enzymes pour leurs substrats ont été mesurées et les propriétés structurales étudiées. La gs est une protéine octamérique de masse moléculaire de 380 kda, composée de sous-unités identiques de 42 kda. La gdh a nadp est un hexamère de 298 kda dont les sous-unités identiques ont une masse de 47 kda. Le séquençage de quelques polypeptides montre la forte homologie entre la gs de l. Laccata et la gs de plantes supérieures, entre le gdh de l. Laccata et la gdh de champignons ascomycètes. Les tests immunologiques ont révélé que les anticorps produits contre ces deux enzymes sont très spécifiques et ont permis de localiser ces deux enzymes dans le mycelium végétatif de l. Laccata ou en association symbiotique avec les racines de douglas. La technique de marquage a l'or colloïdal révèle que ces deux enzymes sont reparties uniformément dans les différents tissus de la mycorhize et qu'elles sont toutes deux localisées dans le cytosol des cellules fongiques

  • Titre traduit

    Contribution to the study of glutamine synthetase and glutamate dehydrogenase in the ectomycorrhizal fungus laccaria laccata : purification, physical properties and localization in douglas fir ectomycorrhizas


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Informations

  • Annexes : 156 ref.

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