Cryptate d'europium (III) trisbipyridine et détection d'acides nucléiques ciblés par fluorescence en temps résolu

par Evelyne Lopez

Thèse de doctorat en Biochimie. Biologie moléculaire et cellulaire

Sous la direction de GERARD MATHIS.

Soutenue en 1992

à Montpellier 2 .


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  • Résumé

    L'application des sondes nucleiques au domaine du diagnostic medical est aujourd'hui en partie liee au developpement de traceurs non isotopiques. Les etudes menees sur les caracteristiques d'emission des ions de terres rares ont conduit a la synthese d'un compose macromoleculaire a longue duree de vie de fluorescence: le cryptate d'europium (iii) trisbipyridine (tbp (eu#3#+)). Notre objectif a ete d'appliquer ce nouveau traceur a la detection d'acides nucleiques cibles. Dans un premier temps les potentialites du tbp (eu#3#+) en terme de specificite et sensibilite ont ete evaluees sur la base d'une methodologie dot-blot. Les signaux d'hybridation mesures selon le principe de la fluorescence en temps resolu, directement au niveau du support solide, ont permis de detecter jusqu'a 2 attomoles d'adn cible (pbr 322). Par la suite nous avons combine la technique d'amplification enzymatique in vitro (pcr) et le tbp (eu#3#+) pour developper une methodologie rapide de detection d'acides nucleiques viraux (hpv-16) au sein d'echantillons cliniques. Dans cette voie, l'activite specifique et la stabilite du tbp (eu#3#+) ont conduit a des resultats identiques a ceux obtenus par la methode isotopique de reference (#1#2#5i). Ces travaux montrent les aptitudes du tbp (eu#3#+) et suggerent le developpement de nouveaux formats d'essai bases sur le principe de la fluorescence en temps resolu

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  • Détails : 141 f
  • Annexes : Bibliogr.: f. [128]-141

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