Caracterisation et utilisation de genes du metabolisme bacterien pour la detection specifique d'escherichia coli-shigella spp. Et streptococcus pyogenes par sondes nucleiques

par PHILIPPE CLEUZIAT

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de JANINE ROBERT-BAUDOUY.

Soutenue en 1992

à Villeurbanne, INSA .

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  • Résumé

    L'identification de microorganismes d'importance medicale ou sanitaire par hybridation moleculaire est apparue dans les annees 80 et connait actuellement un developpement rapide, notamment dans le domaine de la bacteriologie. La conception de sondes nucleiques pour la detection d'especes bacteriennes a ete abordee rationnellement sur la base de caracteres biochimiques qui leur sont propres: la -glucuronidase (-gur) d'escherichia coli et la pyrrolidone carboxylyl peptidase (pyrase) de streptococcus pyogenes. La region uid du chromosome d'e. Coli, comprenant le gene de structure de la -gur (uida) et son principal gene regulateur (uidr) s'avere un marqueur genetique caracteristique des especes e. Coli et shigella spp. (s. Boydii, s. Dysenteriae, s. Flexneri et s. Sonnei). L'hybridation de sondes ayant pour cible ce locus genomique unicopie autorise une detection d'environ 10#4 cellules viables, cette sensibilite pouvant etre abaissee de 10 a 1 bacteries suite a l'amplification in vitro du gene uida par pcr (polymerase chain reaction). La caracterisation moleculaire du gene conferant l'activite pyrase de s. Pyogenes a ete realisee. Ce gene, appele pcp, possede une phase de lecture ouverte de 645 nucleotides et code pour un polypeptide de 215 acides amines (23135 da). La surexpression de pcp chez e. Coli a permis la purification et l'etude de son produit. La divergence nucleotidique du gene pcp de s. Pyogenes par rapport a ses homologues fonctionnels bacteriens et sa conservation au sein de cette espece ont ete confirmees par pcr. Des sondes nucleiques specifiques ont ainsi pu etre definies a l'interieur du gene pcp de s. Pyogenes, permettant la mise au point d'un systeme d'amplification pour la detection de cet organisme


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