Synthese d'anticorps bispecifiques par voie chimique. Application au couplage de deux reactions enzymatiques : glucose oxydase/peroxydase

par VERONIQUE MIRIBEL

Thèse de doctorat en Génie enzymatique, Bioconversion et Microbiologie

Sous la direction de Jean-Louis Boitieux.

Soutenue en 1992

à Compiègne .

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  • Résumé

    Le transfert direct ou «channeling» d'un produit intermédiaire de son site actif de synthèse à son site de transformation dans une chaine de réactions enzymatiques consécutives, constitue une des hypothèses relative au contrôle des voies métaboliques. L'originalité de cette étude repose sur la co-immobilisation de deux activités enzymatiques sur un anticorps bispécifique servant d'agent de couplage. L'anticorps bispécifique permet la juxtaposition des deux sites actifs dans une configuration spatiale définie avec un rapport stoechiométrique de 1/1. Le système modèle étudié est celui de l'oxydation du glucose par la réaction consécutive catalysée par la glucose oxydase d'Aspergillus piger et la peroxydase du raifort. Le but est de déterminer les effets de la concentration en H2O2 sur la cinétique de la réaction globale dans le système couplé (immobilisé) et non couplé (en solution). Ce système expérimental couplé se caractérise par une diminution du temps de latence. La comparaison des résultats expérimentaux et théoriques a permis de mettre en évidence que 60% du substrat intermédiaire est transféré directement du premier site actif vers le second. Les anticorps polyclonaux hybrides spécifiques de la glucose oxydase et de la péroxydase sont synthétisés suivant le protocole de Brennan et al. , après dissociation et recombinaison chimique des fragments Fab' au niveau de leur région charnière. Le rendement de recombinaison des deux monomètres est de 17%

  • Titre traduit

    Synthesis of bispecific antibody by chemical recombinaison. Application to the study of channeling in coupled enzyme reactions : glucose oxidase/peroxidase


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  • Annexes : 123 REF

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  • Bibliothèque : Université de Technologie de Compiègne. Service Commun de la Documentation.
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  • Cote : 1992 MIR 481/1
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