Regeneration de la courgette (cucurbita pepo) et transformation de deux cucurbitaceae : la courgete et le concombre (cucumis sativus)

par MARIANNE NOEL

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de GERARD LEDOIGT.

Soutenue en 1992

à Clermont Ferrand 2 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Deux protocoles de regeneration a partir d'explants cotyledonaires de courgette (cucurbita pepo) sont decrits: 1) l'organogenese directe de novo se produit a partir des parties basales des cotyledons. L'addition de cacl#2 est importante pour l'induction. Un pourcentage d'explants organogenes de 20% est obtenu apres 4 semaines. En moyenne 5 bourgeons sont produits par explant. 2) l'embryogenese somatique indirecte comprend 3 phases, l'induction de cals embryogenes, la maturation des embryons et leur developpement. Le type de gelifiant, la presence de 2,4-d et le genotype sont determinants pour l'induction. L'efficacite d'embryogenese est d'environ 80% et les plantes regenerees sont obtenues apres 2 mois et demi. Des cals embryogenes sont multiplies et selectionnes, a 30c, a l'obscurite. Des suspensions sont initiees et maintenues sans perte de leur potentiel embryogene. L'embryogenese somatique est utilisee pour regenerer des explants cotyledonaires transformes par agrobacterium tumefaciens, l'activite de la b-glucuronidase est detectee pour 12,5% des explants, apres 5 semaines de culture. Aucune plante transformee n'a ete obtenue, cependant l'etude histologique de l'embryogenese met en evidence une perte du potentiel embryogene au cours de l'induction des cals embryogenes. Le bombardement d'explants cotyledonaires avec des microparticules est tres efficace, la quatorzieme assise cellulaire est atteinte par les microbilles. Des cotyledons de concombre (cucumis sativus) ont ete transformes par agrobacterium tumefaciens. Quinze evenements de transformation ont ete obtenus, l'etat transforme des plantes est confirme par un test de resistance a la kanamycine et par la detection de l'activite de la b-glucuronidase. L'analyse par southern blot des plantes ro montre l'insertion de copies de t-dna uniques, multiples ou deletees. La b-glucuronidase s'exprime dans la descendance r1


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  • Cote : TS 7-1992-73
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