Etude de la sequence carboxyle terminale de peptides et de proteines par couplage entre spectrometrie de masse et degradations enzymatiques

par PIERRE GAVARD

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de JEAN-CLAUDE PROME.

Soutenue en 1991

à Toulouse 3 .

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  • Résumé

    Ces dernieres annees, l'etude des proteines par spectrometrie de masse a connu un grand developpement. D'autre part, la determination de sequence, par l'extremite c-terminale des proteines reste problematique etant donnees les methodes existantes. Une telle analyse est cependant parfois obligatoire lorsque la determination par l'extremite n-terminale est impossible (peptides n-bloques) ou difficile. Ainsi, au cours de ce travail, les auteurs ont etudie les possibilites de couplage entre reaction enzymatique et spectrometrie de masse par bombardement d'atomes rapide (fab) pour tenter d'apporter une solution a l'analyse de sequences proteiques par l'extremite carboxyle terminale. Dans un premier temps, les auteurs ont developpe un couplage en ligne d'une digestion enzymatique par une exopeptidase et de la spectrometrie de masse en utilisant la fab a flot continu. Ceci aura permis de connaitre la sequence des six premiers acides amines carboxyle terminaux d'un peptide en comprenant quatorze. L'utilisation de la spectrometrie de masse en tandem sur un ion mh#+ d'un peptide accumule par suite d'une etape lente a permis de le sequencer en totalite. Les auteurs ont ensuite developpe le couplage de deux reactions enzymatiques consecutives. La premiere degradation, effectuee par une exopeptidase est suivie par une seconde, effectuee par une endopeptidase. Cette strategie permet de connaitre la sequence carboxyle terminale de proteines que leur masse rend non analysables directement par notre appareil. Ces deux reactions ont tout d'abord ete associees en continu via la fab a flot continu puis en discontinu avec une analyse en fab statique et appliquees a un peptide de vingt-neuf acides amines. La spectrometrie de masse a permis aux auteurs de retrouver la sequence carboxyle terminale de ce pepetide en se basant uniquement sur les differences de masses et donc de s'affranchir, dans une certaine limite, des differences de vitesse d'hydrolyse pour chaque acide amine. Grace a ces techniques, les auteurs ont pu localiser et differencier des peptides isomeres branches par des groupes glutamyles analogues synthetiques de la partie c-terminale de la tubuline

  • Titre traduit

    Study of carboxyl and sequence of peptides and proteins by coupling of mass spectrometry and enzymatic degradation


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Informations

  • Annexes : 101 REF

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  • Bibliothèque : Université Paul Sabatier. Bibliothèque universitaire de sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 1991TOU30183
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