Facteurs de croissance issus de chondrosarcomes murins et humains : purification - identification - activité mitogénique - stabilité

par Rachida Azzabi

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Jacqueline Jozefonvicz.

Soutenue en 1991

à Paris 13 .


  • Résumé

    Les facteurs de croissance jouent un rôle très important dans la croissance cellulaire et tumorale. La purification et la caractérisation de certains de ces facteurs de croissance à partir de chondrosarcomes riches en fgfs ont été effectuées. Dans un premier temps, les tumeurs ont été broyées en présence ou en absence de collagénase et constituent l'extrait brut. Cet extrait a été ensuite purifié par chromatographie échange d'ions et/ou d'affinité sur differentes resines. Un facteur basique, le fgfb, a été isolé, purifié successivement sur résine biorex 70 et sur héparine sépharose. Ce facteur retenu sur resine d'héparine sépharose est élue avec un tampon phosphate de force ionique 1,5 m nacl. Son existence a étè confirmée par un test de proliferation cellulaire sur une lignée fibroblastique type ccl39, et par dosage immunoenzymatque à l'aide d'un anticorps anti bfgf. Un facteur acide, le fgfa, a été identifié dans une autre fraction éluée en tampon phosphate de force ionique 1 m nacl, après élution directe de l'extrait brut sur gel d'héparine sépharose. Ce facteur a été détecté par dosage immunoenzymatique, par test de prolifération cellulaire, par électrophorese sur gel de polyacrylamide et par transfert (western blot). Sa présence dans la fraction élué dépend du prétraitement effectué sur la tumeur (thermotherapie). Elle est aussi fonction du type d'extraction (en présence ou en absence de collagenase). Par ailleurs, des activités mitogènes ont étè détectées dans les fractions contenant les protéines non retenues sur biorex 70 et celles non retenues sur héparine sépharose. Des etudes physicochimiques (effet de la température, du ph et des agents reducteurs) effectuées sur ces différentes fractions ont montré qu'elles contiennent des facteurs de croissance autres que les fgfs, probablement du pdgf, tgf, egf. . . En vue de caractériser ces facteurs, les protéines non retenues sur "Biorex 70" et non retenues sur héparine sépharose ont été éluées parallèlement sur héparine sépharose et polystyrène fonctionnalisé par des groupements sulfonates (66%) et sulfamide de L -sérine 14%. Deux fractions ont été ainsi séparées en tampon phosphate 0. 5 et 0. 8 M Nacl, et présentent également une activité mitogène


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Informations

  • Détails : 1 vol. (222 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 192

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris 13 (Villetaneuse, Seine-Saint-Denis). Bibliothèque universitaire. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH 1991 024
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