Etude de la pectase lyase de point isoelectrique acide, pla, et d'une hemoproteine, pecx, de la souche 3937 d'erwinia chrysanthemi : role de ces deux proteines dans le pouvoir phytopathogene de la bacterie

par SYLVIE FAVEY BEL

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Martine Boccara.

Soutenue en 1991

à Paris 11 .

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  • Résumé

    Le gene pela de la souche 3937 d'erwinia chrysanthemi qui code une pectate lyase de point isoelectrique acide, a ete sequence et caracterise. Le gene de structure est constitue d'une phase ouverte de lecture de 1179 bp codant un polypeptide de 41555 daltons, qui possede une sequence signal. Le clonage du gene pela derriere le promoteur de lacz du vecteur ptz19r a permis la surproduction de pla dans une souche deletee de ces autres genes pel construite a partir de la souche 3937. La proteine mature a ete purifiee et obtenue en grande quantite a partir du surnageant de cette souche. Ses proprietes biochimiques ont ete determinees et des anticoprs polyclonaux diriges contre la pla purifiee ont ete obtenus. La production des pl est stimulee dans les tissus de plante, en anaerobiose et en carence en fer, mais dans tous les cas, l'activite pla ne represente que 3 a 5% de l'activite pl totale produite par la souche sauvage. Bien que necessaire, cette enzyme n'est pas suffisante pour obtenir une virulence comparable a la souche 3937. Une mutagenese a l'aide du mini-mu mudiipr13 (cm#,lac), dans la region du gene pela, a permis de mettre en evidence un gene en amont de pela qui semblait etre son regulateur. La sequence de ce gene, pecx a ete realisee et fait apparaitre une phase ouverte de lecture de 1185 pb codant une proteine de 44230 daltons. La sequence peptidique de pecx est fortement homologue a celle de la proteine d'escherichia coli, codee par le gene hmp et qui possede une activite dihydropteridine reductase. L'analyse de la sequence a mis en evidence que pecx etait constitue d'au moins deux domaines, l'un etant homologue aux globines et l'autre correspondant a une activite reductase. Une fusion pecx-lac, a ete introduite par recombinaison homologue dans le chromosome de la souche 3937 d'erwinia chrysanthemi. En condition de culture micro-oxygenee, ce mutant pecx# produit une quantite reduite de pectate lyase et autres enzymes depolymerisantes et inocule a des plants de saint-paulia, il presente une agressivite tres reduite par rapport a la souche 3937. Le role possible de pecx dans une regulation dependante de la concentration en oxygene est discute

  • Titre traduit

    Study of pectate lyase which has an acidic isoelectric point, pla, and of hemoprotein, pecx, of erwinia chrysanthemi strain 3937: role of these two proteins in phytopathogenicity bacteria


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  • Annexes : 179 REF

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  • Cote : TH2014-010453
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