Etude des adn polymerases chez les archaebacteries

par ABDELLAH HAMAL

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Patrick Forterre.

Soutenue en 1991

à Paris 11 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Une adn polymerase thermophile a ete purifiee a homogeneite chez l'archaebacterie thermoplasma acidophilum. L'analyse de l'adn polymerase purifiee sur gel de polyacrylamide en conditions denaturantes revele qu'elle correspond a polypeptide de 588 kda qui co-sedimente avec l'activite adn polymerase sur gradient de saccharose. La combinaison de la sedimentation et du gel filtration ont permis de conclure que l'adn polymerase purifiee est une enzyme monomerique constituee d'un unique polypeptide de 88 kda. Cette adn polymerase est resistante a l'aphidicoline, peu sensible au ddttp et inhibee par le nem lorsqu'elle est prealablement pre-incubee a haute temperature. L'adn polymerase purifiee chez t. Acidophilum possede une activite exonuclease 35 associee qui est stimulee en presence du manganese; les deux activites adn polymerase et exonuclease sont optimales a 65c mais l'activite exonuclease est beaucoup plus thermostable que l'activite adn polymerase. Par la suite, on a mis en evidence une activite exonuclease 35 manganese-dependante associee a l'adn polymerase purifiee chez s. Acidocaldarius. Ce resultat a ete confirme par la co-precipitation de l'activite exonuclease avec l'activite adn polymerase, et sa neutralisation par des anticorps anti-adn polymerase purifies. L'analyse des extraits bruts de differentes archaebacteries, par la technique d'immunotransfert, en presence d'anticorps prepares contre l'adn polymerase chez s. Acidocaldarius nous a permis de montrer qu'une adn polymerase apparentee a celle de s. Acidocaldarius existe chez d'autres archaebacteries. On a detecte d'autres activites adn polymerase dans differents extraits bruts d'archaebacteries; ces activites sont plus thermostables chez les hyperthermophiles que chez les sulfolobales. Enfin, dans l'extrait brut d'archaeglobus, l'activite adn polymerase est inhibee a 50% en presence de 100 m d'aphidicol


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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-010386
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