Caracterisation fonctionnelle et moleculaire du transport d'uree par diffusion facilitee

par SONIA MARTIAL

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de PIERRE RIPOCHE.

Soutenue en 1991

à Paris 7 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    L'uree joue un role essentiel dans les processus de concentration de l'urine de mammifere, dont le but est d'eviter la deshydratation d'un animal se trouvant en etat de deficience hydrique plus ou moins avancee. Le transport d'uree a travers la membrane des cellules impliquees dans ces mecanismes a ete mesure a l'aide d'une technique de filtration ultra-rapide consistant a mesurer le flux d'uree-#1#4c a travers des vesicules membranaires, pendant des temps de l'ordre de quelques dizaines de millisecondes. Nous avons ainsi montre que des transporteurs d'uree, vraisemblablement proteiques, existaient dans la membrane plasmique des hematies humaines et la barriere apicale des cellules du tubule proximal de rein de lapin. Une sonde permettant l'isolement biochimique de la proteine a ete recherchee par des mesures de flux d'uree-#1#4c et des experiences de marquage par photoaffinite: le flux d'uree a travers la vessie de grenouille, modele du canal collecteur de mammifere, a ete mesure et plusieurs analogues de l'uree, porteurs d'un groupement azido (-n#3) photosensible, ont ete testes pour leur capacite d'inhibition de ce flux. Nous avons montre que la 1-methyl-3-(3-azido,4-chloro-phenyl)-2-thiouree se liait irreversiblement au transporteur d'uree, apres une illumination de 30 minutes en lumiere blanche. Cette molecule constitue une sonde utilisable pour isoler le transporteur a partir d'un homogenat cellulaire. L'arn messager codant pour le transporteur d'uree a par ailleurs ete caracterise. L'arn a ete purifie a partir des cellules epitheliales de la vessie de grenouille, riches en transporteurs d'uree. Il a ensuite ete microinjecte dans des ovocytes de xenopus laevis ou son expression a conduit a l'apparition de proteines membranaires de transport d'uree, se traduisant par une augmentation de la permeabilite a l'uree des ovocytes. L'arnm efficace, de taille 6-10 kb, sera utilise pour la detection de l'adn complementaire qui sera alors clone et sequence


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Informations

  • Annexes : 180 REF

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  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • Accessible pour le PEB
  • Cote : TS1991
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