Detection rapide des agents modifiant le profil de methylation de l'adn au niveau des sites #5#cpg#3#

par DENIS BIARD

Thèse de doctorat en Sciences médicales

Sous la direction de Alain Sarasin.

Soutenue en 1991

à Paris 7 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Afin de detecter les produits exogenes perturbant le profil de methylation de l'adn nous avons etabli un clone cellulaire (a4/4) derive des cellules humaines 293. La perturbation du profil de methylation de l'adn est evaluee au niveau transcriptionnel du gene d'e. Coli codant pour la beta-galactosidase (lacz). Dans les cellules a4/4 le gene lacz est sous le controle du promoteur de souris de la metallothioneine i (mmt-i). La transcription du gene lacz est reprimee par la methylation des sites #5#cpg#3# dans le promoteur mmt-i et dans la region 5 du gene lacz. La transcription du gene lacz est aussi regulee par le complexe d'e. Coli lac operateur/represseur et elle depend de l'inductibilite par les metaux lourds du promoteur mmt-i. L'activite de la beta-galactosidase est recuperee seulement en presence d'un agent demethylant comme la 5-azacytidine (5az). La reactivation de la transcription du gene lacz apres un traitement par la 5az entraine une expression tres importante de ce gene correlee avec la demethylation du promoteur mmt-i et des regions avoisinantes. La 5az, l'inducteur specifique de l'operon lactose (isopropyl b-d-thiogalactopyranoside) et les metaux lourds peuvent augmenter les activites de la beta-galactosidase de 600 fois au-dessus de l'expression de base. Le potentiel demethylant des produits exogenes peut etre analyse par cytometrie de flux (facs atc 3000). Une augmentation tres importante du nombre de cellules lacz#+ est obtenue en presence de ces produits. Cette approche devrait permettre de detecter les agents demethylants de l'environnement


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  • Annexes : 270 REF

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  • Cote : TS1991
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