Production et culture de protoplastes de chondrus crispus stackhouse (gigartinales, gigartinacees). Application a l'etude du genome

par Yvan Le Gall

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Pierre Lasserre.

Soutenue en 1991

à Paris 6 .

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  • Résumé

    Au cours de ce travail de these, la production de iota et de kappa-carraghenases a ete mise au point a partir de cultures de bacteries marines. Le mode d'action des concentrats de kappa-carraghenase a ete partiellement caracterise et compare au mode d'action de plusieurs carraghenases purifiees. Grace a cet approvisionnement en carraghenases, nous avons pu determiner les conditions optimales pour l'isolement de protoplastes a partir de la macroalgue marine chondrus crispus stackhouse (gigartinales, gigartinacees). Les rendements de protoplastes obtenus a partir des gametophytes de c. Crispus sont les plus eleves a ce jour pour l'ensemble des vegetaux. Les chutes saisonnieres observees dans les rendements en protoplastes sont discutees ainsi que le role de la cellulase et de la iota-carraghenase. L'effet positif d'un chelateur du potassium, le kryptofix 222, a ete demontre. Ce materiel abondant a ete mis en culture afin de tenter de regenerer les protoplastes jusqu'au stade de la plante entiere. La regeneration de la paroi ainsi que des divisions et des germinations cellulaires ont ete obtenues en culture. Nous avons attribue l'arret du developpement des protoplastes de c. Crispus au manque de totipotence initiale des cellules. La maitrise de la production des protoplastes nous a permis de quantifier l'adn nucleaire et d'evaluer le gc pourcent chez c. Crispus et chez neuf autres especes de macrophytes marins, par analyse des noyaux isoles en cytometrie de flux. Une nouvelle modelisation, basee sur le marquage du genome par la mithramycine et l'hoechst 33342, a ete utilisee pour l'evaluation du gc pourcent. Nous avons egalement mis au point une methode d'extraction et de purification de l'adn nucleaire et de l'adn chloroplastique de c. Crispus


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  • Annexes : 510 REF

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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1991
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