Regulation de l'expression des genes au cours du developpement precoce de l'embryon d'oursin : clonage et etude des cdnas de l'enzyme d'eclosion et d'une metalloprotease regulatrice

par THIERRY LEPAGE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de FRANCOIS CUZIN.

Soutenue en 1991

à Nice .

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  • Résumé

    L'enzyme d'eclosion de l'embryon d'oursin est une protease secretee au stade blastula pour digerer la membrane de fecondation, une enveloppe protectrice mise en place lors de la fusion des gametes. L'enzyme d'eclosion est synthetisee de facon transitoire a un moment precis de l'embryogenese et le gene de cette enzyme est un modele potentiel pour l'etude de l'expression des genes au cours du developpement. Dans le but d'etudier ses proprietes et les mecanismes qui controlent sa synthese, nous avons purifie l'enzyme d'eclosion de l'espece paracentrotus lividus. Des anticorps diriges contre la proteine purifiee de 51 kda et contre une forme autolysee de 30 kda ont ete obtenus. Ces anticorps ont permis d'isoler un clone de cdna contenant la totalite de la sequence codante de l'enzyme d'eclosion a partir d'une banque de cdna representative des messagers de stade blastula precoce, construite dans le vecteur d'expression gt11. Cette protease possede une organisation en domaines et une sequence d'acides amines similaires a celles des metalloproteases de la famille des collagenases. Les messagers de l'enzyme d'eclosion ne sont pas detectables dans l'uf vierge, ils s'accumulent au cours de la segmentation et disparaissent apres l'eclosion. Cette expression transitoire est le resultat d'une regulation au niveau de la transcription du gene. Le messager de l'enzyme d'eclosion n'est donc pas un messager maternel mais un transcrit synthetise a un stade tres precoce a partir du genome embryonnaire. A partir de la meme banque et en utilisant le meme anticorps, un cdna codant pour une proteine differente a egalement ete isole. Cette deuxieme proteine est une enzyme secretee de 64 kda. Cette molecule, appelee bp10 (blastula protease), contient plusieurs domaines: un peptide d'activation, un domaine catalytique avec un centre actif caracteristique des metalloproteases a zinc, un domaine homologue a


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