Approche des relations structure-fonction de protéines se liant à l'actine par la méthode de génie génétique

Structure function relationship in actin binding proteins-analysis by genetic engineering

• Auteur / Autrice : Soudhir A Colote
• Direction : Jean-Pierre Liautard
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biochimie. Biologie moléculaire et cellulaire
• Date : Soutenance en 1991
• Etablissement(s) : Montpellier 2

Mots clés

Mots clés contrôlés

Technologie des protéines

Génie génétique

Relations structure-activité

Protéines de liaison

Résumé

Les proteines liant l'actine jouent un role regulateur en modulant la vitesse de polymerisation des actines g et l'organisation tridimensionnelle, intracellulaire des filaments d'actines. Elles font partie integrante de l'appareil contractile et definissent aussi la morphologie cellulaire. Ces proteines sont souvent presentes sous differents isoformes dans differents types cellulaires et s'affairent a des taches differentes. Leurs expressions varient dans des conditions physiologiques differentes et dans des cas pathologiques. Nous avons choisi trois de ces proteines: les tropomyosines, la gelsoline et la fodrine, pour une etude structure-fonction de ces molecules en utilisant les techniques du genie genetique. Dans un premier temps, nous avons utilise differentes methodes de clonage des adnc qui nous ont permis de constituer des outils. Ensuite, nous avons effectue une etude de type phyletique pour permettre, dans le cas des tropomyosines, de definir les regions specifiques de chaque isoforme. Puis nous avons regarde l'expression differentielle des isoformes de tropomyosine correspondant a l'etat differencie et non differencie d'une cellule en utilisant la lignee: hl60 ou u937 comme modeles. Nous avons, par la suite, mis au point une methode de clonage generale qui pourrait etre appliquee au clonage des proteines se liant a l'actine, basee sur des interactions proteine-proteine directes. D'autre part, au cours de ces travaux, nous avons mis au point quelques techniques de purification des acides nucleiques en utilisant la chromatographie liquide a haute performance