Approches structurale et fonctionnelle des tryptophanes de l'ATPase-F1 mitochondriale de la levure Schizosaccharomyces pombe : fluorescence intrinsèque et modification chimique

par Gilles Divita

Thèse de doctorat en Sciences. Biochimie

Sous la direction de Danièle C. Gautheron et de Attilio Di Pietro.

Soutenue en 1991

à Lyon 1 .

Le président du jury était Danièle C. Gautheron.

Le jury était composé de Attilio Di Pietro.


  • Résumé

    L'atpase-f1 de la levure schizosaccharomyces pombe a l'originalite de posseder deux tryptophanes internes par sous-unite alpha, strategiquement situes et presentant une fluorescence intrinseque caracteristique. Un tryptophane supplementaire est present sur epsilon a l'interface avec delta; la formation du complexe delta/epsilon induit un fort deplacement bathochrome du maximum d'emission et une attenuation importante de fluorescence. La fluorescence intrinseque de f1 est essentiellement due aux tryptophanes des sous-unites alpha qui constituent une sonde intrinseque tres sensible. La fixation des nucleotides au site catalytique, fortement amelioree a ph acide, induit une attenuation de fluorescence et revele une heterogeneite des tryptophanes indiquant une asymetrie structurale et fonctionnelle des sous-unites alpha. Les nucleotides adenyliques se fixent a deux classes de sites cooperatifs: catalytique et regulateur. Le phosphate produit un deplacement bathochrome du maximum d'emission, caracterisant une augmentation de la compacite. La modification chimique selective des tryptophanes par le n-bromosuccinimide permet de distinguer une premiere classe composee des trois tryptophanes en position 257 sur alpha, dont la modification n'altere pas l'activite de l'enzyme; ils sont situes aux interfaces alpha/beta, a proximite du site catalytique. Une deuxieme classe contient un seul tryptophane, en position 190 sur alpha, a proximite du site regulateur: sa modification inactive totalement l'enzyme mais est empeche par la presence de nucleotide a ce site. Une troisieme classe comporte trois tryptophanes inaccessibles

  • Titre traduit

    Structural and functional approaches of tryptophan residues in the yeast schizosaccharomyces pombe mitochondrial f1-atpase: intrinsic fluorescence and chemical modification


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Informations

  • Détails : 1 vol. (264 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 249-261

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  • Bibliothèque : Université Claude Bernard (Villeurbanne, Rhône). Service commun de la documentation. BU Sciences.
  • Disponible pour le PEB
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