Production de la lectine k99 d'e. Coli. Construction et utilisations preliminaires d'une sonde biotinylee

par ABDELOUAHAB OUADIA

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Raymond Julien.

Soutenue en 1991

à Limoges , en partenariat avec Université de Limoges. Faculté des sciences et techniques (autre partenaire) .

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  • Résumé

    La lectine k99 est produite par certaines souches d'escherichia coli enterotoxinogenes pour le veau, l'agneau et le porcelet. Elle permet la colonisation du tractus intestinal par interaction avec des sialoglycoconjugues n-glycolyles de l'epithelium. Nous avons dose la lectine k99 au cours de la croissance. Sa production a la surface de la bacterie atteint son maximum pendant la phase exponentielle. Elle passe par des maxima et des minima au cours de la phase stationnaire. Parallelement, l'accumulation des sous-unites qui la composent dans l'espace periplasmique suit les memes variations mais en opposition de phase avec sa polymerisation a la surface bacterienne. Nous exposons le protocole de purification qui nous a permis d'obtenir la lectine pure et la methodologie utilisee pour sa detection. Apres activation des fonctions carboxyles de la proteine par un carbodiimide, la lectine est couplee a la biocytine hydrazide (bchz). L'etude des parametres de la reaction a permis de retenir un rapport de concentration bchz/sous-unite k99 de 250. Dans ces conditions 2 biotines sont fixees par sous-unite sans en alterer l'activite, mesuree par hemagglutination. Nous avons teste la specificite de reconnaissance sur des glycolipides separes par chromatographie sur couche mince. La lectine biotinylee (cbiok99) reconnait specifiquement le n-glycolyl-sialyl-lactosyl-ceramide (neugcgm3) avec une forte affinite. Nous presentons ensuite, dans un essai preliminaire, l'utilisation du cbiok99 comme sonde de detection des acides sialiques in situ sur des cellules hela

  • Titre traduit

    Production of e. Coli k99 lectin. Construction and preliminary utilisations of biotinylated probe


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Informations

  • Annexes : 170 REF

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  • Bibliothèque : Université de Limoges (Section Sciences et Techniques). Service Commun de la documentation.
  • Disponible pour le PEB
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