Elaboration d'un système de fusion d’opérons utilisant le gène uid A d'Escherichia Coli K 12 : Contribution à l’étude des signaux de transcription de la bactérie industrielle Corynebacterium glutamicum

par Nicolas Bardonnet

Thèse de doctorat en Biochimie

Sous la direction de François Stoeber.

Soutenue en 1991

à Lyon, INSA , en partenariat avec MIC – Microbiologie, RA 177. INSA, Lyon (laboratoire) .


  • Résumé

    L' étude des signaux transcriptionnels est essentielle pour la compréhension de l'expression des gènes et des processus de régulation qui s'y rattachent. La connaissance de la région promoteur, responsable en majeure partie de l'efficacité de la transcription, est particulièrement importante lorsque l'on veut employer une souche à des fins industrielles. Afin de concevoir un système de fusion de gènes facile à mettre en œuvre et utilisable par un grand nombre de micro organismes, nous avons construit des vecteurs et des cassettes de fusion d'opérons utilisant le gène uidA d'Escherichia Coli K-12. Le nombre et la diversité des sites de clonage ainsi que le choix possible des marqueurs de sélection rendent ces outils très performants et faciles à employer. Ils permettent la localisation et l'analyse de signaux transcriptionnels, l'obtention de mutants par insertion, l'introduction de sites de clonage et de nombreuses constructions génétiques. Leur utilisation pour l'étude des signaux de transcription de C. Glutamicum montre que les promoteurs fonctionnant à la fois dans ce micro-organisme et dans E. Coli ne sont pas des promoteurs forts d'E. Coli mais partagent des traits communs avec l e consensus d'E. Coli. Par ailleurs, les signaux de terminaison rho-indépendants d'E. Coli fonctionnent imparfaitement chez les corynébactéries. L'emploi de substrats chromo géniques nous a permis d'isoler des signaux directement dans une co rynébactérie. Ce résultat encourageant offre des perspectives nouvelles, très intéressantes, pour l'étude des signaux de transcription de ces micro organismes industriels.

  • Titre traduit

    = Construction of gene fusion system with the Escherichia coli K-12 uidA gene as reporter : Analysis of transcriptional signals in the industrial microorganism Corynebacterium glutamicum


  • Résumé

    Transcriptional signal study is essential for our understanding of gene expression and gene regulation process. Our knowledge of the promoter region, which is the most important factor of transcription efficiency, is particularly important for an industrial utilization of microorganisms. On the purpose of elaborating an attractive gene fusion system that allowed easy transcriptional signal analysis of various microorganisms, we have constructed a set of promoter and terminator-probe vectors and cassettes. These constructs are based on the utilization of the Escherichia col K-12 uidA gene. The great number of cloning sites that can be employed and the diversity of selectable markers make these tools very useful. Thus, they provide a good mean for transcriptional signal investigations, insertion mutagenesis, cloning sites introduction and genetic construction. This system was successfully used for transcription signal analysis of Corynebacterium glutamicum. Indeed, we found that promoters working both in E. Coli and in this microorganism are not very stronger signals in E. Coli and share commun features with E. Coli promoter consensus. Otherwise, it seems that E. Coli rho-independent terminators do not work well in corynebacterias. Using electroporation and glucuronidase chromogenic substrates we succeeded in isolating promoters and terminators in C. Glutamicum. This offers interesting prospects for s ignal study in corynebacterias.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (112 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr.

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  • Bibliothèque : Institut national des sciences appliquées (Villeurbanne, Rhône). Service Commun de la Documentation Doc'INSA.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : C.83(1330)
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