Regénération de plantes à partir de protoplastes d'Helianthus annuus L. Et transformation génétique par électroporation

par Monique Burrus

Thèse de doctorat en Biologie et technologie végétales

Sous la direction de Gilbert Alibert.

Soutenue en 1991

à Toulouse, INPT .


  • Résumé

    L'amélioration du tournesol cultive nécessite l'élargissement de sa base génétique, rendu difficile par de fortes incompatibilités sexuelles dans le genre helianthus. Le transfert de gènes par électroporation de protoplastes permet de contourner ce problème mais exige la maitrise de la régénération de plantes fertiles, puis la mise au point d'un protocole d'électroperméabilisation. Un protocole standard d'isolement et de purification de protoplastes d'hypocotyles sur gradient de ficoll a été mis au point. La culture de protoplastes en gouttes d'agarose dans un milieu l4 modifie a conduit a la formation de cals. L'étude a porté sur plusieurs génotypes mais la différenciation de pousses n'a été possible que pour une seule lignée. Les plantes régénérées étaient fertiles. Ce travail décrit pour la première fois la régénération de plantes entières et fertiles a partir de protoplastes chez helianthus annuus. L'étude des paramètres d'electroporation en présence des gènes gus et nptii a conduit à une expression transitoire élevée et reproductible. Le système retenu est caractérise par un milieu d'electroporation de force ionique élevée et un champ électrique exponentiel, de faible intensité mais de durée longue. Les constructions géniques retenues initialement pour le gène nptii ont été optimisées chez le tournesol. L'introduction d'une séquence leader de virus, la modification de la séquence autour du site d'initiation de la traduction et l'élimination de sequences en aval du codon de terminaison du gène nptii, ont amélioré l'expression transitoire d'un facteur 60. Dans ces conditions, des colonies transformées ont été obtenues.

  • Titre traduit

    Sunflower plant regeneration from hypocotyl protoplasts and transformation by electroporation


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Informations

  • Détails : 197 f.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. f. 174-197

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  • Cote : 1991INPT001A

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