Hydroxylases steroidogeniques. Purification et regulation de la 17 alpha-hydroxylase-c17,20-lyase microsomiale. Etude par rmn du phosphore 31 des mitochondries corticosurrenaliennes

par Anne Perrin

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Geneviève Defaye.

Soutenue en 1991

à Grenoble 1 .

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  • Résumé

    La 17 alpha-hydroxylase-c17,20-lyase (17 oh-l) bovine est un systeme enzymatique microsomial qui presente une dualite de fonction: 17-hydroxylation de la pregnenolone et de la progesterone, puis coupure c17-20 de la 17-oh-pregnenolone. Elle occupe donc un role cle pour l'orientation de la steroidogenese vers la synthese de mineralo, gluco- ou sexocorticoides. L'activite lyase est tres faible dans le cortex surrenal tandis qu'elle est elevee dans les testicules. La 17 oh-l a ete purifiee a partir de testicules et de cortex surrenal bovins et des anticorps ont ete obtenus. Au cours de la purification, la difference entre les rapports des activites hydroxylase/lyase des deux organes disparait, ce qui suggere une modulation par l'environnement membranaire. Plusieurs aspects de la regulation de la 17 oh-l ont ete abordes; dans les cellules corticosurrenales, le transforming growth factor beta inhibe sa synthese au niveau transcriptionnel. In vitro, la regulation des deux activites par l'environnement membranaire a ete examinee: la difference d'activite lyase entre les deux tissus resulte de son inhibition dans le cortex surrenal, par un element appartenant a la fraction des lipides neutres ou une conformation des proteines induite par leur presence. Une seconde partie de ce travail concerne l'etude, par rmn du #3#1p, des mitochondries corticosurrenales bovines. L'identification des principaux metabolites phosphores, l'evaluation de leurs concentrations et l'acces a la valeur du ph matriciel ont permis de suivre la synthese d'atp. Elle s'accompagne d'une entree de phosphate inorganique et d'une basification du milieu extramitochondrial. Ces deux phenomenes n'ont pas lieu en presence d'un substrat steroide, la synthese d'atp est momentanement stoppee durant l'hydroxylation


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