Etudes de l'asparaginyl-tRNA synthétase d'Escherichia coli

par Jocelyne Anselme

Thèse de doctorat en Biol.

Sous la direction de HARTLEIN.

Soutenue en 1991

à Grenoble 1 .


  • Résumé

    Le gene asns codant pour l'asparaginyl-trna synthetase (asnrs) d'escherichia coli a ete clone et sequence. Le debut de la sequence codante a ete confirme par sequencage direct de la proteine; le cadre de lecture ouvert code pour une proteine de 52,5 kd, en accord avec le poids moleculaire d'une sous-unite de l'enzyme determine par electrophorese sur gel denaturant. La construction d'un vecteur surproduisant l'asnrs a grandement facilite sa purification, l'enzyme representant plus de cinquante pour cent des proteines cytosolubles des bacteries portant ce plasmide. Les etudes biochimiques indiquent que la fixation des substrats asparagine et atp sur l'enzyme s'effectue de facon aleatoire, et qu'il existe un site de haute affinite pour chacun des substrats par dimere d'enzyme. Les parametres cinetiques pour l'asparagine et l'atp ont ete determines pour la formation de l'intermediaire aminoacyladenylate, et pour la reaction totale d'aminoacylation. La comparaison de l'asnrs avec les autres aminoacyl-trna synthetases indiquent une homologie importante avec les aspartyl- et lysyl-trna synthetases, temoignant d'une origine commune probable. Des experiences de mutagenese dirigee sur une region conservee entre ces enzymes ont permis de montrer son importance fonctionnelle dans la fixation de l'atp: le remplacement de la tyrosine 426 par une serine entraine une augmentation de quinze fois du km pour l'atp, sans alterer les parametres cinetiques pour les autres substrats, tandis que le remplacement de cet acide amine par une phenylalanine n'a virtuellement pas d'effets

  • Titre traduit

    Studies of the asparaginyl-trna synthetase from escherichia coli


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  • Détails : 123, [28] p

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  • Bibliothèque : Service interétablissements de Documentation (Saint-Martin d'Hères, Isère). Bibliothèque universitaire de Sciences.
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  • Bibliothèque : Service interétablissements de Documentation (Saint-Martin d'Hères, Isère). Bibliothèque universitaire de Sciences.
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  • Cote : TS 91/GRE1/0061
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