Étude de l'acétohydroxyacide isoméroréductase de l'épinard (Spinacia oleracea)

Study of acetohydroxyacid reductoisomerase from spinach (spinacia oleracea)

• Auteur / Autrice : Renaud Dumas
• Direction : Roland Douce
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie
• Date : Soutenance en 1991
• Etablissement(s) : Grenoble 1

Mots clés

Mots clés contrôlés

Enzymes

Acides aminés à chaîne ramifiée

Épinard

Mots clés libres

Biochimie analytique

Structurale et metabolique

Isomeroreductase

Acetolactate

Acetohydroxybutyrate

Lambda gt 11

Adnc

Peptide transit

Nadph

Résumé

L'acetohydroxyacide isomeroreductase (isomeroreductase), enzyme impliquee dans la biosynthese des acides amines a chaine ramifiee (leucine, isoleucine et valine), catalyse la transformation du 2-acetolactate et du 2-aceto-hydroxybutyrate respectivement en 2,3-dihydroxyisovalerate et 2,3-dihydroxy-3-methylvalerate, en une reaction en deux etapes debutant par une migration du groupement alkyl suivie d'une reduction de la fonction carbonyl par le nadph. Dans cette these, nous presentons la purification a homogeneite et l'etude des proprietes physicochimiques et cinetiques de l'isomeroreductase d'epinard (spinacia oleracea). La preparation d'anticorps polyclonaux specifiques de l'isomerureductase d'epinard nous a permis de cribler une banque d'adnc (clonee dans le vecteur d'expression lambda gt 11) et d'isoler un adnc correspondant a l'isomeroreductase d'epinard. Ainsi, nous avons pu determiner la sequence en acides amines de l'isomeroreductase (523 acides amines) et de son peptide transit (72 acides amines). Nous avons aussi identifie le site de reconnaissance du nadph et un site qui pourrait intervenir dans la migration du groupement alkyl catalysee par l'isomeroreductase. En outre, les experiences de southern realisees, nous ont permis de montrer que l'isomeroreductase d'epinard etait codee par un gene unique par genome haploide present sur un fragment d'adn de 7,5 kpb et contenant au moins 4 introns