Étude fonctionnelle d'une protéine non structurale de rotavirus : la protéine NS53 fixe le zinc et l'ARN

par Philippe Brottier

Thèse de doctorat en Microbiologie

Sous la direction de Jean Cohen.


  • Résumé

    Les rotavirus constituent un groupe de virus classe dans la famille des Reoviridae et sont reconnus comme l'agent étiologique majeur des gastro-entérites néonatales de nombreuses espèces animales. Notre connaissance du cycle viral est encore très incomplète et en particulier du rôle joué par les cinq protéines non structurales dans la réplication virale. La protéine non structurale NS53 codée par le segment 5 est synthétisée à faible niveau dans la cellule. Pour étudier ses propriétés fonctionnelles, l'ADNc du gène 5 de rotavirus bovin a été cloné dans un vecteur de transfert baculovirus sous le contrôle du promoteur fort de la polyédrine. Les baculovirus recombinants expriment, dans les cellules d'insecte, la protéine NS53 en quantité importante sous une forme stable mais insoluble. L'expression abondante de la protéine recombinante nous a permis d'obtenir un antisérum spécifique de la protéine NS53 naturelle présente dans les cellules MA104 infectées par le rotavirus. A l'aide de ce sérum, nous avons confirmé que la protéine NS53 n'est pas associée aux particules virales simple ou double capside, mettant ainsi fin aux controverses sur sa nature non structurale. L'analyse de la séquence de la protéine révèle la présence de deux arrangements de cystéines caractéristiques d'un motif « doigt à zinc » récemment identifié dans la séquence de nombreuses protéines régulatrices qui fixent les acides nucléiques. De plus, bien que le segment 5 montre une extrême variabilité de séquence, le motif « doigt à zinc » de l'extrémité NH2 terminale de la protéine NS53 reste hautement conservé au sein des souches de rotavirus des groupes A et C. Par l'utilisation de plusieurs méthodes, nous avons montré que la protéine recombinante fixe spécifiquement le zinc et que celui-ci est impliqué dans la conformation compacte de la protéine en solution. En outre, la purification de la protéine recombinante par FPLC nous a permis de mettre en évidence la fixation de l'ARN simple brin sur la protéine. L'ensemble de ces résultats nous conduit à formuler l'hypothèse que la protéine NS53 pourrait être impliquée dans la formation des particules précoces RI et le regroupement ou l'encapsidation de l'ARN (+) dans les particules virales immatures.

  • Titre traduit

    Functional study of a rotavirus non structural protein : the protein NS53 binds zinc and RNA


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Informations

  • Détails : 1 vol. (175 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. 276 réf.

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  • Cote : 1991 BRO 402

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