Étude des relations structure-fonction de la thiorédoxine de Rhodobacter sphaeroides Y : expression et mutagénèse du gène trxA

par Sabine Pille

Thèse de doctorat en Génie Enzymatique, Bioconversion et Microbiologie

Sous la direction de Jenny D. Clément-Métral.


  • Résumé

    La thiorédoxine est une petite protéine dithiol-disulfure multifonctionnelle et omniprésente. Ses qualités structurales et fonctionnelles en font une protéine modèle pour l'étude des relations structure-fonction des molécules biologiques. Chez Rhodobacter sphaeroides, bactérie pourpre photosynthétique facultative, la thiorédoxine interviendrait dans la régulation de la synthèse de la bactériochlorophylle par l'oxygène. Dans ce travail, nous avons détecté et isolé le gène codant pour la thiorédoxine, à l'aide d'oligonucléotides synthétisés d'après la séquence connue de la protéine, à partir d'une banque d'ADN génomique de R. Sphaeroides que nous avons construite. Le gène a ensuite été sous-cloné dans le vecteur M13mp18 pour être sequencé et dans le vecteur pKK233-2 pour être exprimé sous contrôle du promoteur trc. Nous avons analyse la complémentation de la thiorédoxine de R. Sphaeroides chez un mutant Escherichia coli déficient en thiorédoxine. Nous avons remarqué ainsi que, contrairement à la thiorédoxine d'autres organismes, la protéine de R. Sphaeroides remplace la thiorédoxine de E. Coli dans son interaction avec la DNA polymérase du phage T7. La protéine de R. Sphaeroides a ensuite été modifiée par mutagenèse dirigée au niveau du gène de manière à ce que la glycine 74 soit remplacée par une sérine. Nous avons ainsi montré que cette substitution affectait la multiplication du phage T7. Ce résultat nous permet d'émettre l'hypothèse selon laquelle la glycine 74 serait un résidu important dans l'interaction structurale impliquant la thiorédoxine et la T7 DNA polymérase.

  • Titre traduit

    Structure-function relationships of thioredoxin : expression and mutagenesis of the trxA gene of Rhodobacter sphaeroides


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Informations

  • Détails : 1 vol. (206 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. 219 réf.

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  • Bibliothèque : Université de Technologie de Compiègne. Service Commun de la Documentation.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 1991 PIL 375
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