Etude de deux proteines du reseau rnp nucleaire. Clonage des cdna. Relations avec le choc thermique et l'epissage

par PHILIPPE MAHL

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de MONIQUE JACOB.

Soutenue en 1990

à Strasbourg 1 .

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Résumé

Les hnrnp, qui sont associees au reseau rnp nucleaire, sont le siege de l'epissage des rna premessagers. Afin de pouvoir detecter puis etudier des facteurs intervenant dans le controle de cette fonction, nous avons tire parti du fait que l'episage ainsi que le transport nucleocytoplasmique sont transitoirement inhibes apres un choc thermique sublethal drastique. A l'aide de notre banque d'anticorps monoclonaux anti-hnrnp, nous avons montre dans les cellules hela qu'un choc thermique a 45#oc provoque tres rapidement le deplacement de 2 doublets d'antigenes. En fait, ces antigenes, appeles 2h9 (35-37 kd) et 6d12 (72,5-74 kd), quittent la population majeure de hnrnp dont les caracteristiques generales ne sont cependant pas affectees. Un tel comportement suggere que ces antigenes pourraient effectivement intervenir dans le controle de l'epissage. Pour les antigenes 2h9 ceci a ete directement demontre grace a l'utilisation d'un systeme d'epissage in vitro. Apres avoir caracterise ces antigenes a l'aide des anticorps monoclonaux 2h9 et 6d12, nous avons mis en uvre une seconde approche basee sur le clonage des cdna. Ceci nous a permis de determiner la sequence primaire complete de ces antigenes. La combinaison des deux approches, l'une basee sur l'utilisation des anticorps et l'autre sur celle des cdna, nous permettra par la suite de faire progresser l'etude fonctionnelle de ces 2 doublets d'antigenes

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