Role respectif des membranes apicales et basolaterales dans les mecanismes de transport d'eau a travers les structures epitheliales

• Auteur / Autrice : FRANCOISE VAN DER GOOT
• Direction : Paul Vigny
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1990
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

Le role respectif des membranes apicales et basolaterales de cellules epitheliales dans le transport de l'eau a ete etudie sur deux tissus de nature tres differente: 1) le tubule proximal de rein de lapin, qui sous l'influence d'un gradient osmotique de faible amplitude transporte des quantites d'eau tres importantes; 2) la vessie de grenouille, utilisee comme modele du canal collecteur renal, qui est generalement soumise a un tres important gradient osmotique et dont la permeabilite est controlee par l'hormone antidiuretique (adh). Par des mesures de spectrophotometrie a flux interrompu, nous avons pu montrer que les permeabilites osmotiques (pf) des membranes apicales et basolaterales du tubule proximal sont tres elevees. L'inhibition de pf par des agents sulfhydryls, suggere la presence, dans ces deux membranes plasmiques, de canaux proteiques responsables du passage de l'eau. L'obtention de coefficients de reflexion de nacl et de kcl proches de 1 indiquent une certaine selectivite de cas canaux vis-a-vis de l'eau. Concernant la vessie de grenouille, des mesures de diffusion d'eau tritiee a travers des vessies dont la membrane apicale avait ete traitee par l'amphotericine b, ont montre que la permeabilite diffusionnelle a l'eau (pd) de la membrane basolaterale etait tres elevee, independamment de toute stimulation par l'adh. La sensibilite de pd a certains agents sulfhydryls met en evidence l'existence de canaux proteiques transmembranaires apparemment semblables a deux rencontres dans les membranes cellulaires du tubule proximal. Finalement, nous proposons une approche originale visant a isoler les canaux hydriques qui apparaissent dans la membrane apicale de la vessie de grenouille, lors d'une stimulation par l'adh. Les vesicules d'endocytose, qui apparaissent dans les cellules a granules de la vessie apres retrait de l'hormone, ont ete marquees a l'aide d'un marqueur fluorescent puis triees par cytometrie en flux. L'electrophorese sur gel de polyacrylamide de ces endosomes fait apparaitre deux bandes majoritaires de 55 et 67 kda. Ces deux proteines pourraient faire partie, ou etre, les canaux hydriques mis en evidence lors des precedentes mesures de permeabilite