Etude du comportement chromatographique des sous-classes d'igg humaines. Mise au point d'une methode de dosage des sous-classes d'igg dans les preparations d'immunogloublines

par PHILIPPE BRIDONNEAU

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Florence Lederer.

Soutenue en 1990

à Paris 6 .

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  • Résumé

    Afin d'ameliorer la qualite des preparations d'immunoglobulines qu'il propose, le cnts s'interesse a la purification des immunoglobulines par des techniques chromatographiques. Nous avons donc entrepris l'etude du comportement des 4 sous-classes d'igg humaines sur 4 supports chromatographiques differents, compatibles avec une utilisation industrielle: hydrophobe, thiophile, echange d'ions et hydroxyapatite. Pour cela, il nous a fallu mettre au point une methode de dosage des sous-classes d'igg, adaptee a notre produit de depart (solution d'immunoglobulines obtenues par precipitation a l'alcool et a l'acide caprylique: allergamma). Ce dosage repose sur une technique elisa simple couche. Pour chaque type de gel, nous avons fait varier differents parametres pouvant intervenir sur les performances des colonnes (ph, force ionique, nature du sel, temperature. . . ). Les gels peuvent etre regroupes en 2 categories. Sur les gels d'interactions hydrophobes et d'adsorption thiophile, en presence de sulfate d'ammonium 1m, la plupart des immunoglobulines s'adsorbent sur le gel. Elles sont eluees tout le long d'un gradient de force ionique decroissante. Il y a donc un comportement heterogene des immunoglobulines, mais il n'y a pas d'elution selective en fonction de la sous-classe d'igg. Sur les gels echangeurs d'anions et sur hydroxyapatite, on peut, a faible molarite et a ph basique, obtenir une fraction enrichie en igg2 (72%) et en igg4 (7%), peu adsorbee sur la colonne. En revanche, sur un gel echangeur de cations, a faible molarite et a ph acide, une fraction tres enrichie en igg4 (20%) est eluee en fin de gradient de force ionique croissante

  • Titre traduit

    Study of the chromatographic behaviour of human igg subclasses development of an igg subclasses titration technique


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  • Annexes : 122 REF

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