Purification de chromosomes murins par cytometrie en flux : construction et caracterisation d'une banque genomique du chromosome 19 et apport a sa cartographie

par Bruno Baron

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Roger Acher.

Soutenue en 1990

à Paris 6 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    L'evolution actuelle des techniques de cartographie conduit a effectuer la separation physique des chromosomes eucaryotes, principalement par cytometrie en flux. Les chromosomes murins, qui sont tres proches les uns des autres en taille, le caryotype murin standard analyse par cytometrie en flux ne donne naissance qu'a 5 ou 6 pics distincts, ce qui ne permet pas d'individualiser les chromosomes entre eux. Pour lever ces difficultes, nous avons etabli des lignees a partir de cellules dont le caryotype comporte des chromosomes issus de translocations robertsonniennes: l'analyse du caryotype en flux de ces cellules permet de mettre en evidence des pics de fluorescence isoles specifiques de chromosomes murins non modifies. Par cette approche, le tri des chromosomes x et y de souris a pu etre effectue, permettant l'etablissement de banques genomiques specifiques de l'adn de ces chromosomes. Nous avons de la meme maniere effectue le tri de chromosomes 19 murin et construit une banque d'adn genomique a partir de fragments de restriction ecori de ce chromosome. Cette banque comprend environ 3. 10#4 clones avant amplification, sans redondance observee. L'analyse par flow-blots de sondes prelevees dans cette banque a permis de montrer que 8 clones sur 9 doivent provenir de chromosomes 19 tries, ce qui atteste la purete de la banque. L'analyse de la segregation du polymorphisme de restriction de clones de cette banque a ete effectuee, et leur position sur le chromosome 19 etablie d'apres des marqueurs de reference, permettant d'avancer la cartographie genetique de ce chromosome encore peu etudie


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