Diffusion des macromolecules fluorescentes dans les gels de chromatographie d'exclusion

par MOHSEN MOUSSAOUI

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Philippe Wahl.

Soutenue en 1990

à Orléans .

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  • Résumé

    Nous avons etudie la diffusion des proteines globulaires et des dextranes dans les perles de gels de chromatographie suivants: sephadex g200, ultrogel aca34, sepharose 6b-cl, 4b-cl et 2b-cl. Les macromolecules etudiees portent des residus fluoresceines fixes par des liaisons covalentes. Ces residus peuvent induire une adsorption partielle du solute sur le gel. La constante d'adsorption kp est alors egale au rapport des coefficients de partage kc dans le gel du solute marque et non marque. La diffusion des macromolecules marquees a ete mesuree par la methode du retour de la fluorescence apres photoblanchiment. L'analyse de ces mesures, montre que les solutes fluorescents inclus dans les gels sont mobiles a 100% et que leur diffusion peut etre caracterisee par un coefficient d. Le coefficient de diffusion des molecules non marquees peut se calculer en multipliant celui des macromolecules marquees par kp. Pour un type de macromolecules donne, la courbe experimentale representant la variation du coefficient relatif de diffusion d/do (ou do est le coefficient de diffusion du solute dans le solvant pur) en fonction de kc, est caracteristique du gel. Les courbes des trois gels sepharose sont identiques entre elles. La courbe de l'ultrogel aca34 relative aux proteines suit celle de la fonction theorique d'ogston et al. (1973). Pour un kc donne, d/do diminue dans l'ordre suivant: sephadex g200, ultrogel aca34, sepharose. Nous discutons ces resultats en relation avec la structure fibreuse des gels utilises. D'autres travaux seront necessaires pour preciser comment cette structure influe sur d/do


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