Maintien autonome et recombinaison d'elements genetiques dans des familles de souris transgeniques et des cellules en culture

par JOELLE VAILLY

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de FRANCOIS CUZIN.

Soutenue en 1990

à Nice .

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  • Résumé

    Les plasmides ppylt1, qui code pour la proteine grand t de polyome, p12b1, qui contient un fragment d'adn de souris reconnu par la proteine grand t in vitro, et p12b2, qui contient le ltr du virus mmtv, ont ete injectes dans des ufs fecondes de souris. Treize lignees de souris transgeniques ont ete obtenues, et l'une de ces lignees, repliquant les plasmides p12b1 et p12b2 a l'etat autonome de facon stable, a ete plus particulierement etudiee. Ces plasmides sont transmis avec une efficacite de 100% a la descendance. La replication et le maintien autonome de p12b1 peut s'expliquer par la presence de 2 blocs cde1 et cde3 homologues aux blocs des centromeres de levure, et de sequences ars potentielles de souris. L'injection de p12b1 seul entraine une tres haute frequence de transgenese et une integration du plasmide. Le transfert de p12b1 seul ou en cotransfection avec ppylt1 montre que ce plasmide s'integre dans des cellules en culture. Les profils d'integration dans la lignee cellulaire c127 suggere une haute frequence de recombinaison, et l'analyse de cellules ltk-transfectees, selectionnees pour une amplification. De facon interessante, un plasmide contenant les sequences muars peuvent etre amplifiees dans les cellules ltk-, et peut se repliquer de facon autonome dans des transgeniques sans etre transmis a la descendance. L'instabilite de p12b1 in vitro peut etre correlee a l'instabilite genetique generalement observee au cours des etapes de la progression tumorale


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  • Annexes : 170 REF

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