Clonage de l'échangeur Na+/H+ humain sensible à l’amiloride : une glycoprotéine phosphorylée activée par les facteurs de croissance

par Claude Sardet

Thèse de doctorat en Sciences de la vie

Sous la direction de Jacques Pouysségur.

Soutenue en 1990

à Nice .


  • Résumé

    Le clonage du gène humain codant pour l'échangeur Na+/H+ a été réalisé par une approche indirecte et originale. Des mutants de fibroblastes de souris en culture ne possédant plus la fonction d'échange Na+/H+ furent isolés. Cette mutation fut complémentée par transfection avec de l'ADN génomique humain. Après clonage de cet ADN humain, un sous-fragment génomique qui possédait les propriétés d'un exon fut utilisé comme une sonde spécifique de la fonction d'échange Na+/H+ pour isoler un ADNc codant pour une protéine transmembranaire de 815 acides-aminés, composée de 10 domaines hydrophobes putatifs suivis d'un long domaine hydrophile. Enfin, l'expression stable de cet ADNc restaure la fonction d'échange Na+/H+ dans les cellules déficientes, démontrant ainsi que la protéine clonée est bien le transporteur. Un anticorps dirigé contre l'extrémité COOH-terminale de l'échangeur Na+/H+ reconnait une glycoprotéine membranaire de 105 KD sur différentes lignées cellulaires indépendantes, d'origine humaine ou de hamster. L'imunoprécipitation du transporteur à partir de cellules marquées in vivo avec de l'orthophosphate radioactif montre qu'il est phosphoryle sur sérine. L’addition de facteurs de croissance sur des cellules quiescentes augmente parallèlement l'état de phosphorylation et l'activité de l'échangeur Na+/H+

  • Titre traduit

    Molecular cloning of the human amiloride-sensitive Na+/H+ antiporter : a phosphorylated glycoprotein activated by growth factors


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Informations

  • Détails : 1 vol. (192 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. f. 163-190. Résumé en français

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