Clonage du gène de la nitrile hydratase de Brevibacterium sp. R 312 : constitution d'un système hôte/vecteur

par Robert Duran

Thèse de doctorat en Biochimie. Biologie cellulaire et moléculaire. Sciences des aliments

Sous la direction de Pierre Galzy.

Soutenue en 1990

à Montpellier 2 .


  • Résumé

    Le clonage du gene de la nitrile hydratase de brevibacterium sp. R 312 est realise. Les conditions pour la constitution d'une banque genomique sont etablies. La recherche de l'expression enzymatique de la banque n'a pas donne de resultats. La purification de la nitrile hydratase est realisee. L'enzyme est constituee de deux sous-unites differentes nommees (27 kda) et (27,5 kda). La sequence peptidique n-terminale de chaque sous-unites est determinee. Des sondes oligonucleotidiques correspondantes sont synthetisees. Deux clones nh 431 et nh 432 donnant un signal positif par hybridation avec les deux sondes sont isoles et etudies. Les fragments clones ont une taille de 4 kb environ. Ni l'expression, ni la synthese du produit du gene ne sont mises en evidence chez e. Coli. Pour surmonter les problemes d'expression du gene, la constitution d'un systeme hote/vecteur chez brevibacterium sp. Est realise. Un plasmide navette e. Coli/brevibacterium sp. Nomme p5r2 est construit. Les conditions de transformation de protoplastes de la souche brevibacterium sp. Sont etablies. Le clonage de sequences promoteurs est realise. Un promoteur fort est isole et son etude preliminaire realisee

  • Titre traduit

    Cloning of nitrile hydratase gene from brevibacterium sp. R 312. Constitution of a host/vector system


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Informations

  • Détails : [4], 259, [12] f
  • Annexes : Bibliogr.: f. [228]-259

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  • Cote : TS 90.MON-007
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