La réaction de transgalactosylation chez Bifidobacterium bifidum souche AA 2/2 : 1) Optimisation de la production et détermination de la structure primaire des produits de transgalactosylation : 2) purification et étude du système enzymatique

par Vincent Dumortier

Thèse de doctorat en Sciences de la vie et de la santé. Biochimie

Sous la direction de Stéphane Bouquelet.

Soutenue en 1990

à Lille 1 .


  • Résumé

    En milieu acide, l'hydrolyse du lactose par B. Bifidum entraîne la formation d'oligosaccharides. Les produits néosynthétisés (depuis les disaccharides jusqu'aux nonasaccharides) représentent 30% (p/p) des saccharides totaux. Ils se caractérisent par un regreffage spécifique du galactose par des liaisons beta (1-3) glycosidiques. L'enzyme responsable de cette activité de transgalactosylation a été purifiée. C'est une beta-d-galactosidase membranaire qui ne représente que 0,8% de l'activité hydrolytique initiale. Elle résulte d'un assemblage de plusieurs sous-unités de masse moléculaire apparente de l'ordre de 362 kDa. Son point isoionique est de 5,25. L'étude des propriétés enzymatiques a montré que les conditions de transfert (pH 4,8 et température de 45°C, Km 800 mM) sont très différentes des conditions d'hydrolyse (pH 6,5 et 37°C, Km 13 mM). La réaction est sensible au calcium qui est un activateur de l'activité hydrolytique au détriment de la réaction de transfert. La transgalactosylation ne peut s'effectuer que sur des accepteurs glycosylés possédant une structure parfaitement définie (fonction hémiacétalique bloquée, structure pyranique, fonction hydroxyle du C2 en position équatoriale). L'ensemble des résultats nous amène à proposer deux modèles pour expliquer la synthèse par mécanisme intermoléculaire des oligosaccharides. Le rôle biologique des produits de transgalactosylation à partir de lactose a été abordé.

  • Titre traduit

    Transgalactosylation reaction from lactose by Bifidobacterium bifidum : 1) optimal synthesis conditions determination and structural characterization of oligosaccharides : 2) purification and study of the enzyme


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