Clonage et expression chez Escherichia coli de gènes de Bacteroides impliqués dans la dégradation des dextrans

par Jean-Charles Joncquiert

Thèse de doctorat en Sciences de la vie et de la santé

Sous la direction de Jean-Baptiste Guillaume.

Soutenue en 1990

à Lille 1 .


  • Résumé

    Des gènes de la souche Bacteroides thetaiotaomicron 489 impliqués dans la dégradation du dextran ont été clonés chez E. Coli. Après criblage d'une banque génomique dans le vecteur plasmidique pBR322 et repiquage de 16000 transformants de la souche E. Coli HB101, 43 clones produisant des zones de dégradation ont été mis en évidence sur milieu riche contenant du bleu dextran t2000. Après de multiples repiquages, 10 clones se sont révélés être stables et donner des halos de dégradation reproductibles. L'étude de ces 10 plasmides a été entreprise et les cartes de restriction ont été établies. Les inserts portés par les différents plasmides ont des tailles comprises entre 3,2 et 8,4 kb et 2 des inserts sont identiques. Des expériences d'hybridation insert/DNA chromosomique de Bacteroides et insert/insert ont été réalisées et les résultats montrent certaines homologies entre différents inserts. L'expression de l'activité dextranasique est faible chez E. Coli en utilisant le pBR322. Nous avons donc réalisé le sous-clonage du plus petit insert (3,2 kb) dans le plasmide d'expression pDR720 (qui porte le promoteur de l'opéron tryptophane) et 1 clone positif a été isolé. La taille de l'insert a ainsi été réduite à 0,7 kb. Le niveau d'expression des gènes a été augmenté mais la dégradation du dextran se fait suivant un phénomène retardé. Ces résultats semblent indiquer que les enzymes sont intracellulaires et ne sont repérés qu'après lyse des cellules. Le séquençage ultérieur de l'insert sous-cloné devrait permettre d'optimiser la production de l'enzyme correspondant dans une souche d'intérêt industriel

  • Titre traduit

    Cloning and expression in escherichia coli of genes from bacteroides involved in breakdown of dextrans


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Informations

  • Détails : 1 vol. (178 f.)
  • Annexes : Bibliogr. f. 163-178

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  • Bibliothèque : Université des sciences et technologies de Lille (Villeneuve d'Ascq, Nord). Service commun de la documentation.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 50376-1990-95
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