Isolement et purification de la thymidine kinase de type foetal

par GUY BARON

Thèse de doctorat en Sciences biologiques

Sous la direction de Pierre Jouan.

Soutenue en 1989

à Rennes 1 .

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  • Résumé

    La purification de la thymidine kinase ftale a ete mise au point sur le foie du ftus de rat puis appliquee a la tk-f de cellules mcf-7. Le protocole defini ne comporte que 2 etapes. La premiere etape est une chromatographie sur mini-colonnes de deae-sephadex a50 visant a separer les 2 isoenzymes ftal et adulte. La deuxieme etape est une chromatographie d'affinite sur gel de sepharose couple a la thymidine: l'adsorption de la tk se fait en batch. En raison de la grande labilite de l'enzyme purifie, plusieurs stabilisateurs ont ete testes. Seule la digitonine s'est averee vraiment efficace en permettant de multiplier par 4 a 5 le rendement de purification soit un rendement final de 90%. Le taux de purification atteint 200000 environ. La tk-f purifiee par une etude de quelques-unes de ses proprietes physico-chimiques. La tk-f de foie de rat a un phi de 8,3. La tk-f de cellules mcf-7 est legerement plus basique avec un phi de 9. Par ailleurs, les 2 enzymes ont une structure trimerique constituee de sous-unite d'une masse moleculaire de 24 kd et de 29 kd respectivement


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Informations

  • Détails : 1 vol. (145 f.)
  • Annexes : 130 REF

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université de Rennes I. Service commun de la documentation. Section sciences et philosophie.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TA RENNES 1989/124
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