Effets de solvants organiques sur le repliement de l'élastase pancréatique porcine étudiés par la transition conformationnnelle en fonction du pH

Organic solvents effects on porcine pancreatic elastase refolding studied by the pH-dependent conformational transition

• Auteur / Autrice : Emmanuel Jaspard
• Direction : Charis Ghélis
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques
• Date : Soutenance en 1989
• Etablissement(s) : Paris 11

Mots clés

Mots clés contrôlés

Solvants organiques

Repliement des protéines

Élastases pancréatiques

Résumé

Les effets de certains solvants organiques sur la stabilisation de la forme native de l’élastase pancréatique porcine ont été étudiés par la dépendance en fonction du pH de la transition de l’enzyme au cours du processus de renaturation. Les signaux que nous avons suivis ont été l’activité enzymatique, la spectrophotométrie de différence d’absorption dans l’ultra-violet, le dichroïsme circulaire et la fluorimétrie. L’équilibre de protonation qui implique le résidu d’acide aminé N- terminal n’est pas modifié en présence de solvants organiques. L’acylation de la sérine 195 de l’enzyme induit un déplacement vers les pH alcalins de la courbe de transition suivie par spectrophotométrie de différence d’absorption. L’amplitude de ce déplacement est comparable à celui qui est observé en présence de solvants organiques. La présence de solvants organiques dans le milieu de renaturaiton augmente le temps de latence observé avant atteinte de l’activité enzymatique maximale. Ce résultat indique qu’une modification des propriétés du milieu affecte les étapes qui conduisent au dernier intermédiaire du repliement. Les données obtenues par des méthodes structurales sur la dépendance en fonction du pH de la transition conformationnnelle de l’élastase, nous amènent à formuler l’hypothèse d’un rôle conjoint de deux résidus d’acides aminés dans le contrôle du processus de renaturation de l’élastase.