Structure et fonctionnement de deux proteines membranaires, l'atpase calcique du reticulum sarcoplasmique et l'adenylate cyclase du cortex surrenalien : utilisation de la fluorescence pour l'etude des interactions proteine-proteine, proteine-lipide et enzyme-substrat

par BEATRICE DE FORESTA

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Paul Vigny.

Soutenue en 1989

à Paris 6 .

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  • Résumé

    L'adenylate cyclase hormono-sensible est un complexe membranaire multi-proteique. Le couplage entre les differents composants du systeme: recepteur, proteine g et unite catalytique a ete etudie en correlant l'activite enzymatique en presence de differents effecteurs a l'etat de fluidite de la membrane, caracterisee par des mesures d'anisotropie de fluorescence de marqueurs. La fluidite membranaire apparait comme un facteur de regulation de l'activite: en particulier, la fluidite pourrait influencer la formation d'aggregats de recepteurs. Un autre enzyme membranaire, l'atpase calcique du reticulum sarco-plasmique a ete utilise pour etudier plus specifiquement les interactions proteine-lipide et proteine-detergent. On utilise pour cela des echantillons de membrane reconstitues avec de l'atpase et des phospholipides bromes, qui eteignent la fluorescence des trp par contact. Ces etudes ont montre le role de l'organisation des phospholipides sur l'activite de l'enzyme ainsi que l'importance de la taille de la tete polaire des detergents comme critere de solubilisation. La meme methodologie montre egalement que la stabilite de l'enzyme solubilise depend de la presence de lipides residuels associes a la proteine. Enfin, les changements conformationnels de la ca#2#+-atpase au cours des differentes etapes du cycle catalytique ont ete caracterises a partir des variations d'intensite de fluorescence de differentes classes de trp de la proteine. La selection de ces trp a ete effectuee par extinction partielle de la fluorescence (extinction statique ou transfert de forster) par differentes molecules: phospholipides bromes, ionophores, analogue de l'atp. On montre ainsi par exemple que la fixation du ca#2#+ sur la proteine produit des changements conformationnels impliquant des trp localises a la surface de la proteine dans la region membranaire


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  • Annexes : 150 REF

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
  • Accessible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1989
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