Contribution de la resonance magnetique nucleaire du phosphore 31 a l'etude du metabolisme des macrophages au cours de l'activation

par FRANCOIS SEGUIN

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Jean-Philippe Grivet.

Soutenue en 1989

à Orléans .

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  • Résumé

    La resonance magnetique nucleaire du phosphore 31 a ete mise en uvre pour l'etude du metabolisme energetique des macrophages au cours de leur activation. Sur la ligene p388 d1, consideree comme un modele presentant la plupart des caracteristiques des macrophages matures, l'activation entraine une augmentation de l'expression de la creatine kinase, caracteristique de la maturation. L'etude du metabolisme au cours de la bouffee respiratoire declenchee chez des macrophages actives in vivo par le lps a ete realisee sur des cellules p388 d1 incluses dans des filaments de gelose et perfusees. Compte tenu de la cinetique du phenomene metabolique etudie, un traitement du signal par une technique de moyenne mobile a du etre developpe pour ameliorer la resolution dans le temps qui est limitee par la sensibilite de la rmn. Apres l'induction dans la macrophages de la bouffee respiratoire par la concanavaline a, la cinetique de l'acidification du milieu intracellulaire a ete determinee par le suivi du deplacement chimique du pic du pi. L'etude comparative du ph intracellulaire par une sonde fluorescente, le bcecf, a demontre que l'acidification observee par rmn n'etait pas d'origine cytosolique et qu'elle devrait donc correspondre au compartiment lysosomal. A partir des intensites des pics et de l'atp, la determination du raport atp/adp a permis de mettre en evidence un accroissement transitoire de la phosphorylation de l'adp en rapport avec l'activation du complexe nadph oxydase qui catalyse la production des anions superoxydes (#?o#2#). Cette cinetique a ete confrontee a celle de la liberation des metabolites de l'oxygene (#?o#2#, h#2o#2) determinee par chimiluminescence au cours de la bouffee respiratoire. Pour des applications immunopharmacologiques, cette etude demontre la possibilite, en s'affranchissant de toutes molecules sondes exogenes, de suivre par rmn la reponse meta

  • Titre traduit

    #3#1p nuclear magnetic resonance spectroscopy for the kinetic study of the macrophages metabolism during activation


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  • Annexes : 72 REF

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