Immobilisation de peptides modèles et de la caséine kappa : Application à l'étude de la spécificité de coupure de la chymosine

par Salima Nedjar Boutora

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Jean-Yves Le Déaut.

Soutenue en 1989

à Nancy 1 , en partenariat avec Université Henri Poincaré Nancy 1. Faculté des sciences et techniques (autre partenaire) .


  • Résumé

    Ce travail concerne l'étude de l'activité de la chymosine sur des substrats immobilisés (cytochrome C, chaine B de l'insuline, caséine K et peptides synthétisés au laboratoire). Une première partie a porté sur la recherche d'une méthode optimale d'immobilisation sur 4 résines commerciales (CNBR-, AH-, CH-, et CH-sépharose-activée). Les résines AH et CH-sépharose activées par l'hexafluorophosphate de N, N benzotriazolyl-tetramethyl uronium (H. B. T. U. ) et par la carbodiimide donnent de bons rendements d'immobilisation du cytochrome C. Un meilleur rendement est obtenu avec la CH-sépharose-activée. En deuxième partie l'étude du modèle cytochrome C/chymosine a permis de mettre au point le réacteur enzymatique. La séparation par C. L. H. P. Des produits de dégradation du cytochrome C immobilisé sur deux résines différentes a mis en évidence l'intérêt de l'utilisation d'une résine à bras espaceur. Une troisième partie est consacrée à l'étude de la spécificité de coupure sur la chaîne B de l'insuline immobilisée. L'analyse chromatographique des produits de la réaction montre une hydrolyse rapide dès les premières minutes de la réaction. Ainsi, 8 sites de coupure ont pu être identifiés après séparation par C. L. H. P. Et identification. Enfin la dernière partie de ce travail a porté sur l'hydrolyse de la caséine K, substrat naturel de l'enzyme. La séparation des produits d'hydrolyse par C. L. H. P. Montre 1 pic non aromatique qui pourrait correspondre au caséino-macropeptide. Contrairement aux autres substrats l'heptapeptide synthétisé s'est montré résistant à l'action de la chymosine dans ces conditions réactionnelles


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Informations

  • Détails : 1 vol. (109 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 104-109

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  • Bibliothèque : Université de Lorraine (Villers-lès-Nancy, Meurthe-et-Moselle). Direction de la Documentation et de l'Edition - BU Sciences et Techniques.
  • Accessible pour le PEB
  • Cote : SC N1989 390
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