Approche immunochimique et structurale des deux formes moléculaires de la créatine kinase mitochondriale

par Eric Quéméneur

Thèse de doctorat en Sciences. Biochimie

Sous la direction de Christian Vial.

Soutenue en 1989

à Lyon 1 .

Le jury était composé de Christian Vial.


  • Résumé

    La creatine kinase mitochondriale (ckm) represente un element central du metabolisme energetique cellulaire articule autour du phosphocreatine shuttle. Elle presente la caracteristique unique, par rapport a ses homologues cytosoliques dimeriques (mm mb et bb) d'exister sous deux formes moleculaires interconvertibles sous l'effet du ph et des substrats de l'enzyme. Nous avons prepare des anticorps monoclonaux et polyclonaux contre la ckm de cur de porc et de lapin. L'etude immunochimique a l'aide de ces anticorps permet de montrer qu'a la surface du dimere ckm#1 comme de l'octamere ckm#2, existent des epitopes conformationels specifiques bien que la majorite des anticorps soit dirige contre des epitopes continus presents sur tous les types de monomeres ou exclusivement sur le type mitochondrial. L'immuno-inhibition de la ckm in situ ainsi que l'inactivation par irradiation fournissent des preuves directes que l'enzyme associe aux mitochondries est l'octamere. Les deux formes ne presentent pas de differences fondamentales en ce qui concerne le site catalytique comme en temoigne l'inhibition par un analogue de l'atp, le fsba. Ce dernier permet de deceler l'asymetrie fonctionnelle des sous unites au sein de ckm#1 comme de ckm#2. Des cliches de microscopie electronique ont ete obtenus sur l'octamere. La determination des points isoelectriques et l'etude de la solubilisation de la ckm mettent en evidence la preponderence de la composante ionique dans la liaison a la membrane. L'application des methodes predictives (logiciel antheprot) fournit de nombreuses indications et perspectives sur la structure et le mecanisme catalytique de l'enzyme


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Informations

  • Détails : 1 vol. (95 f.)
  • Annexes : Bibliogr. f. 81-90

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