Contribution à l'étude de l'UDP-glucose : céramide glucosyltransférase golgienne dans les ganglions sous maxillaires de porc

par Isabelle Durieux

Thèse de doctorat en Sciences. Biochimie

Sous la direction de René Got.

Soutenue en 1989

à Lyon 1 .

Le jury était composé de René Got.


  • Résumé

    L'udp-glucose: ceramide glucosyltransferase est l'enzyme responsable de la biosynthese du glucosylceramide, constituant important des membranes et precurseur de nombreux glycosphingolipides. De precedents travaux ont montre que cette enzyme est associe a l'appareil de golgi et situe du cote cytoplasmique. Ce travail nous a permis en utilisant le chaps comme detergent principal d'extraire l'enzyme de la membrane golgienne. L'introduction de glycerol a permis de stabiliser les regions hydrophobes de l'enzyme membranaire et donc la protection de l'activite. La recherche d'un phospholipide essentiel a ete entrepris. La modification de l'environnement lipidique de l'enzyme par action de differentes phospholipases entraine une inactivation totale qui, dans le cas de la phospholipase c peut-etre compensee par l'utilisation de liposomes. La meilleure reconstitution est obtenue avec des liposomes de phosphatidylcholine. L'etude du mecanisme d'action de l'enzyme solubilisee indique une fixation au hasard des deux substrats avec des sites interdependants de fixation. L'effet de differents reactifs sulfhydryls sur la glucosyltransferase demontre la presence de groupements thiols necessaires a l'activite enzymatique et confirme la localisation du cote cytoplasmique dans les vesicules golgiennes right-side-out. Toutes les techniques de purification utilisees n'ont donne que des rendements faibles lies essentiellement a une perte importante d'activite. Il semble que l'on se trouve en presence d'un complexe proteine - detergent - lipide que les interactions chromatographiques destabilisent


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Informations

  • Détails : 1 vol. (153 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 148-153

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  • Bibliothèque : Université Claude Bernard (Villeurbanne, Rhône). Service commun de la documentation. BU Sciences.
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