Synthese de reactifs thiocylants fonctionnels et modification d'enzymes a l'aide de ces reactifs

par VALERIE FANNEAU BELLENGER

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Guy Lévesque.

Soutenue en 1989

à Caen .

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  • Résumé

    Ce travail decrit la synthese de reactifs thioacylants originaux et leur utilisation pour la modification des groupements amines lateraux (-nh#2) des residus lysines de deux proteases, la papaine et l'enzyme de mucor pusillus. La synthese des reactifs employes a porte sur des dithioesters et quelques dithioacides repondant aux criteres suivants: solubilite suffisante en milieu aqueux tamponne; presence d'une fonction ionisable ou reactive dans la chaine. Nous avons prepare des dithioesters -fonctionnels (acide carboxylique, acide phosphone et thio) ainsi que des sels de dithioacides et bis(dithioacides). Les fonctions introduites sont capables de modifier le comportement de la proteine en fonction du ph. Les enzymes modifiees et natives sont comparees par dosage des amines libres, le deplacement du maximum de l'absorption en uv-visible et la mesure de leur activite proteolytique specifique et non specifique. La modification de la papaine avait pour but d'etudier les effets produits par de telles modifications. Nous avons observe des differences de comportement en fonction de la structure chimique du residu introduit (nature de la fonction et hydrophobie de la chaine). Les modifications de l'enzyme de mucor pusillus ont permis d'agir sur le rapport des activites proteolytiques pour orienter l'action de l'enzyme vers une plus grande specificite (action coagulante envers le lait en augmentation relative par rapport a l'action proteolytique globale)


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  • Annexes : 128 REF

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