Mise au point de techniques de dissociation, de purification et de culture cellulaire chez la moule mytilusedulis l. : application a l'etude des regulations du metabolisme du glucose et du glycogene dans les cellules a glycogene (= cellules vesiculeuses)

par Frédéric Lenoir

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Pierre Lubet.

Soutenue en 1989

à Caen .

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  • Résumé

    La mise au point d'une technique de dissociation enzymatique de manteau de moule permet d'obtenir un materiel biologique (suspension de cellules) homogene et susceptible de reponses rapides et quantifiables a des facteurs neuroendocriniens controlant la gametogenese. Ce materiel n'est toutefois adapte que dans le cas de bioessais specifiques d'une categorie cellulaire ou d'un metabolisme particulier (mesure de l'activite atcasique ou de l'incorporation de thymidine). Dans le cas contraire, une purification cellulaire est indispensable. Par utilisation de gradients de percoll, trois categories cellulaires de moule ont ete isolees: des ovocytes, des cellules adipogranuleuses et des cellules a glycogene (= cellules vesiculeuses). Une etude preliminaire a fourni des resultats concernant la composition d'un milieu de culture et le support de fixation cellulaire appropries a la culture de cellules adipogranuleuses. Ainsi, ces cellules ont ete maintenues en culture pendant 21 jours. Le transport de glucose ainsi que les regulations du stockage et de la mobilisation du glycogene ont ete etudies sur les cellules a glycogene purifiees. Le transport de glucose dans ces cellules est assure par un mecanisme constitue par une composante de diffusion et une composante saturable avec la concentration en substrat ou transport facilite principalement responsable de l'entree de glucose dans des conditions physiologiques de glycemie. Si la synthese de glycogene apparait controlee par le taux de glucose circulant, un facteur hormonal d'origine cerebroide de 1500 da (f. A. S. G. ) pourrait agir de maniere synergique. En ce qui concerne la mobilisation du glycogene, elle semble uniquement sous le controle d'une hormone (f. A. D. G. ) d'origine cerebroide et viscerale, de grande taille (20 a 30000 da) et dont la nature proteique a ete mise en evidence


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  • Annexes : 206 REF

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